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土壤酶活性测定方法 一、蔗糖酶: 3，5-二硝基水杨酸比色法 1. 试剂配制 （1） 2N 氢氧化钠200mL：称取16g 氢氧化钠，用蒸馏水溶解，定溶于200mL 容量 瓶中。 （2 ） 3，5-二硝基水杨酸溶液 1000mL：称5g 二硝基水杨酸，溶于200mL2N 氢氧化 钠和500mL 蒸馏水中，再加300g 酒石酸钾钠，用蒸馏水稀释至 1000mL （不超 过7 天）。 （3 ） 1/15M 磷酸氢二钠 1000mL：23.867g Na HPO ·12H O 溶于 1000mL 蒸馏水中。 2 4 2 （4 ） 1/15M 磷酸二氢钾 1000mL：9.078g KH PO 溶于 1000mL 蒸馏水中。 2 4 （5 ） pH5.5 磷酸缓冲液100mL：5 mL 磷酸氢二钠(1/15M)加95mL 磷酸二氢钾(1/15M) （6 ） 8%蔗糖 1000mL：称取80g 蔗糖，用水溶解，稀释至 1000mL。 （7 ） 甲苯。 （8 ） 标准葡萄糖溶液（1mg/mL）1000mL： 取少量葡萄糖在真空干燥箱中，于55℃ 条件下真空干燥至恒重。然后取 1.00g 葡萄糖溶于 100ml 蒸馏水中成标准葡萄 糖母液（10mg 还原糖/ml）。取此母液10ml, 用蒸馏水定容至 100mL 即成标准 葡萄糖液 （1mg/ml）； 2. 操作步骤 （1）标准曲线绘制：分别取标准葡萄糖液 0.4mL，0.8 mL，1.2mL, 1.6mL, 2.0mL,2.8mL, 3.2mL 于50 mL 比色管中，另取一管做空白对照。用蒸馏水补足至10mL。加入3.0mL 3， 5-二硝基水杨酸，沸水浴5min，随即在自来水流下冷却。最后用蒸馏水稀释至50mL，并在 分光光度计上于波长508nm 处进行比色。 比色后，以光密度值为纵坐标，葡萄糖浓度为横坐标绘制成标准曲线。 （2 ）土壤蔗糖酶活性测定：称5.00g 土样，置于50mL 三角瓶中，注入 15.0mL 8%蔗 糖溶液，5.0mL pH5.5 磷酸缓冲液和5 滴甲苯。摇匀混合物后，放入恒温箱，在37℃下培养 24h 。到时取出，6000rpm 离心 10min。取1.0mL 上清液（新鲜土样所吸取的上清液体积为 1.0mL；风干土及保存 1 个月的土样所吸取的上清液体积为0.5mL）于50mL 比色管中，然 后按绘制标准曲线显色方法进行比色测定。 为消除土壤中原有的蔗糖、葡萄糖引起的误差。每一土样需做无基质对照。整个实验 需作无土壤对照。 3 ．结果计算 蔗糖酶活性以24h 后 1g 土壤葡萄糖的毫克数表示。 葡萄糖（mg ）=(a-b) ×c 式中 a从标准曲线查得的样品（加了基质）对应的葡萄糖浓度，mg/mL； b从标准曲线查得的样品对照组的葡萄糖浓度，mg/mL； c换算成 1g 土的系数。 二、脲酶: 靛酚比色法 1. 试剂配制 （1） pH6.7 柠檬酸盐缓冲液 1L：取184g 柠檬酸溶于300mL 蒸馏水中，另取 147.5g KOH 溶于水，再将两种溶液合并，用 1N NaOH 将pH 调至6.7，并用水稀至1L。 （2 ） 苯酚钠溶液：称取62.5g 苯酚溶于少量乙醇中，加2mL 甲醇和18.5mL 丙酮， 然后用乙醇稀释至 100mL(A 液) ，保存在冰箱中。称取27g NaOH 溶于 100mL 水中（B 液），保存在冰箱中。使用前，取A、B 两液各20mL 混合，并用蒸馏 水稀释至 100mL 备用。 （3 ） 次氯酸