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微生物的生长繁殖及其控制笔记第1页/共53页 第 六 章微 生 物 的 生 长繁殖 及 其 控 制 第2页/共53页 微生物的分离和纯培养微生物的生长繁殖及其测定微生物生长繁殖的控制内容提要? ? ? 第3页/共53页 无菌技术微生物培养的常用器具及其灭菌干热灭菌湿热灭菌接种操作无菌条件下进行，工具：接种环或接种针第4页/共53页 纯培养的分离方法 稀释倒（涂）平板法 划线法 选择培养基分离法 单细胞（孢子）分离第5页/共53页 二元培养物主要用于病毒等寄生生物的培养培养物中含有两种微生物，并有意识地保持二者之间的特定关系的培养物称为二元培养物第6页/共53页 微生物的保藏技术干燥保藏法常用作中期保藏，时间为1～5年传代培养保藏常用作短期保藏，4℃保藏，时间为3～4月冷冻保藏法常用作长期保藏，时间为5～10年及以上第7页/共53页 微生物的生长繁殖及其测定微生物生长的测定计数法、重量法、生理指标法微生物的生长繁殖细菌群体生长的规律细菌群体生长的数学模型细菌群体生长的主要参数同步培养连续培养第8页/共53页 生长曲线(growth curve)描述细菌生长规律总菌数活菌数培养时间 Ⅱ.对数期Ⅲ.稳定期Ⅳ.衰亡期Ⅰ.迟缓期细菌数目（个/ml）对数ⅡⅢⅣⅠ细菌群体生长的规律第9页/共53页 延滞期出现原因 把细菌接种到新鲜的培养基中培养时，并不立即进行分裂繁殖，细菌增殖数为０，这时需要合成多种酶，辅酶和某些中间代谢产物，要经过一个调整和适应过程 。第10页/共53页 迟缓期特点生长速率常数等于零菌体粗大 代谢活力强对不良条件抵抗能力降低ＲＮＡ含量增加第11页/共53页 影响延滞期限长短因素接种龄接种量培养基成分第12页/共53页 缩短延滞期的意义和方法可以缩短生产周期，提高设备利用率。接种对数生长期的菌种，采用最适菌龄 加大接种量用与培养菌种相同组成分的培养基第13页/共53页 指数期(对数期)(exponential phase) 特点该期的细菌生产中多被用做种子和科学试验材料 ①活菌数和总菌数接近 ②酶系活跃，代谢旺盛。③生长速率最大，generation time最短。④细胞的化学组成及形态，生理特性比较一致第14页/共53页 NtN0t1t0培养时间Lg 细胞数/mlt2 - t13.322(lgNt-lgN0)生长速率常数R=t1 - t03.322(lgNt-lgN0)代时G=指数期生长的数学模型繁殖代数 n=3.322(lgNt-lgN0)第15页/共53页 影响指数期的因素菌种营养成分营养物浓度培养温度第16页/共53页 稳定期(stationary phase)出现原因 营养的消耗有害代谢产物积累pH值Eh值等理化条件不适出现原因营养物比例失调第17页/共53页 稳定期特点活菌数保持相对稳定，总菌数达最高水平。细菌代谢物积累达到最高峰。芽孢杆菌这时开始形成芽孢。这是生产收获时期。第18页/共53页 衰亡期(decline phase/death phase)特点细菌死亡数大于增殖数,活菌数明显减少,群体衰落 细胞出现多形态,大小不等的 畸形,变成衰退型 细胞死亡,出现自溶现象。第19页/共53页 离心法硝酸纤维素滤膜法获得同步生长(synchronous growth)的方法：机械方法环境条件控制技术（温度、培养基成分控制、其它）过滤法同步培养(synchronous culture)使培养基中细菌同时分裂，处于相同的生长阶段叫同步生长。第20页/共53页 连续培养(continuous culture)(open culture)将微生物置于一定容积的培养基中培养，最后一次收获，叫分批培养，将微生物放在恒定的容积的流动系统中培养称为连续培养。 优点：缩短发酵周期；便于自动控制；产物质 要 量均一 缺点：菌种易退化；易染杂菌第21页/共53页 第22页/共53页 ……含N量法DNA/RNA法叶绿素法菌体内重要组成测定法微生物生长的测定称重量法测体积法N×6.25=Pr测生长量(直接法)第23页/共53页 比 浊 法生理指标法测生长量(间接法)第24页/共53页 计繁殖数血球计数板法液体稀释法平板菌落计数法滤膜培养法各种型号的全自动血球计数仪第25页/共53页 微生物生长繁殖的控制环境因子对微生物生长的影响控制微生物的物理因素控制微生物的化学物质第26页/共53页 环