实验微生物培养基的配制和灭菌.pptxVIP

实验微生物培养基的配制和灭菌;一、实验目的;二、实 验 原 理;3、培养基的种类 （1）培养基按成分可分为：天然培养基、合成培养基和半合成培养基。 （2）按用途可分为：基础培养基、营养培养基、鉴别培养基和选择培养基等。 （3）按物理状态可分为“固体培养基、半固体培养基和液体培养基 。;按照培养基的物理状态可分为 1.液体培养基：不加凝固剂的液体状态培养基。 2.固体培养基：在液体培养基中加入2%左右的凝固剂的固体状态的培养基。 3.半固体培养基：在液体培养基中加入0.2—0.5%凝固剂而成的半固体状培养基。;细菌： pH 7.0~8.0 放线菌：pH 7.5~8.5 酵母菌： pH 3.8~6.0 霉菌：pH 4.0~5.8 藻类： pH 6.0~7.0 原生动物： pH 6.0~8.0; 琼脂是最优良的凝固剂，自1880年开始用于配制微生物培养基以来，至今经久不衰。;细菌： 牛肉膏蛋白胨培养基； 放线菌：高氏1号合成培养基培养； 酵母菌：麦芽汁培养基； 霉菌： 查氏合成培养基；;称量--配置--调节pH值--过滤--分装--灭菌 1.称量 按照培养基配方，准确称量各成份放于烧杯中。对于不是粉状（如肉膏），应用烧杯称量。; 2.配调 向烧杯中加入适量的水，搅拌，使其溶解（可加热助溶）。 如是配制固体培养基，在琼脂的熔化时，需不断搅拌，并控制火力不要使培养基溢出或烧焦。待完全熔化后，补足所失水分。 如果配方中含有淀粉，先将淀粉用少量冷水调成糊状并在火上加热搅拌，然后加足水分及其他药品，待完全熔化后补足所失水分。; 3.调节pH值 培养基溶解均匀并冷却至室温时用pH试纸测pH，然后根据要求加酸或碱（一般用1molHCl和1molNaOH），要缓慢少量且多加搅拌。培养基配方为自然pH时，不用调节。  4.过滤 用滤纸或多层纱布过滤，一般无特殊要求可省去。; 5.分装 将制好的培养基分装入试管内或三角瓶内，管（瓶）口塞上棉塞。固体培养基要趁热装。 分装时要避免培养基粘染管（瓶）口，引起污染。分装量可分为下面几方面：（1）斜面：装量为管长的1/4-1/5。（2）液体培养基、高层培养基、半固体培养基：装载量不超过管长的1/3。（3）三角瓶：装量不超过容积1/2。; 分装后，塞棉塞（胶塞），包扎，灭菌。（1）培养基的灭菌 ①常用的灭菌的方法有：干热灭菌、高压蒸汽灭菌、常压蒸汽灭菌、常压间歇式灭菌超高温灭菌、过滤除菌、辐射灭菌、化学药品灭菌等方法。 ②本实验培养基的灭菌常使用的是高压蒸汽灭菌，它是利用高温湿热空气使菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的。; ③高压蒸气灭菌条件： 一般培养基: 1.05 Kg/cm2, 121.3℃, 15-30 min 含糖培养基: 0.56 Kg/cm2, 112.6 ℃, 15-30 min ; （2）器皿的灭菌：干热空气： 160℃， 2 小时 （3）无菌室的消毒 紫外光 化学药物熏蒸（苯酚；高锰酸钾+甲醛） ;; 加水?装锅?盖盖?加热?当压力升为0.5kg/cm2时排放冷空气?正式升压?保压（1.1kg/cm2，121℃，保持20-30min）?停止加热?自然降压至零?排放余汽?开盖?取出灭菌物品?趁热摆斜面?检验灭菌效果。 ;牛肉膏蛋白胨培养基的配制;; 1.按配方称取一定量的试剂、琼脂到250ml的 三角瓶中。 2. 加入100mL水。 3.塞上硅胶塞,用牛皮纸包扎好。 4.高压蒸汽灭菌。 5.灭菌后,当培养基冷却至50℃左右时,无菌倾注平皿(每100ml可制备5-6个平皿)。 6.凝固后放冰箱备用 。;（二）斜面培养基制作;; 搁置斜面 当培养基冷却至50℃左右时，将试管带棉塞的一端搁在一根木棒上。搁置的长度要合适，使培养基形成的斜面的长度不超过试管总长的一半。; 半固体培养基制作; 牛肉膏蛋白胨—半固体培养基配方;液体培养基制作; 牛肉膏蛋白胨液体培养基按下列配方及方法配制;注：试管加棉塞(最好)，培养基分装完毕以后，在管口上加一个棉塞。棉塞能防止杂菌污染，保证通气良好。加棉塞时，应使棉塞长度的2/3在试管口内，如下图所示。;观看录像;感谢您的欣赏