圆二色谱CD原理.pptxVIP

圆二色谱CD原理;光学活性分子对左、右圆偏光得吸收率得差值;1、自然光;由于感光作用都就是E 引起得,因而,将E 作为光矢量。 振动面:E 与光传播方向组成得平面。;从统计规律上说,自然光得光振动: 在垂直于光速得平面上遍布所有方向, 沿各方向振动得光矢量呈对称分布, 相应光矢量得振幅(光强度)相等。; (1)高亮度得点光源;?(2)日光色。色温接近6000K;(3)在可见光区连续光谱;(4)高显色性,显色指数＞95;(5)在整个寿命期内维持光色特性;(6)高电弧稳定性;(7)热重启能力;(8)启动后即能达到接近最大光输出;(9)电弧光斑小、易聚光。;自然光;双折射现象: 一束光射入各向异性晶体后有两束折射光。 尼科耳棱镜。 ;大家有疑问的，可以询问和交流;;o光和e光:频率相同、振动方向相互垂直、平面偏振光;自然光入射到某些晶体(电气石、硫酸金鸡钠碱晶体等)时,晶片吸收振动面与晶轴垂直得光,而只允许振动面平行于晶轴得光通过。;自然光;也称线(完全)偏振光,简称偏振光。 她得振动面称为其偏振面。 振动方向保持不变 振幅发生周期性变化 E之端点在空间得轨迹为一平面正弦曲线 投影到垂直于光传播方向得平面上为一直线段;4、布儒斯特角;5、四分之一波片;朝光源看, 电场矢量方向按顺时针方向旋转得,称为右圆偏振光; 电场矢量方向按逆时针方向旋转得,称为左圆偏振光。;6、光得叠加;;振幅相等、振动方向相互垂直、相位相差1/4波长得两平面偏振光合成圆偏振光;7、旋光色散(Optical rotatory dispersion,ORD);圆双折射:某个物质对于左、右圆偏光得折射率分别为nL和nR, 若 nL = nR,则为光学各向同性物质; 若 nL ≠ nR,则为光学各向异性物质;左、右圆偏光得相位改变, 若nL＞nR,透射光得偏振面右旋。 若nL＜nR,透射光得偏振面左旋。;旋光,双折射;化合物在正常情况下,处于低能得基态,电子占据所有得成键轨道(σ、π、n轨道)。如果电子吸收了外界得能量,她就从基态跃迁到激发态能级。 如果所有得跃迁仅在基态得最低振动能级和第一激发态之间,吸收光谱将就是很狭窄而不连续得谱线。 由于分子得价电子??迁总伴随着振动和转动能级得跃迁,所以,紫外分光光度计测定物质得吸收光谱,虽然有一最大吸收峰值,但都就是具有一定波长宽度并相对平滑得曲线。;光得吸收;圆二色性得存在将通过该物质传播得左、右圆偏光变成椭圆偏振光。并且只在发生吸收得波长处才能观察到。;理论计算得圆二色性与该椭圆偏振光得摩尔椭圆率得关系:;圆二色性得表示;园二色＋双折射;9、ORD与CD光谱;CD谱得极值处与吸收峰一致(科顿效应,cotton effect),因而分子中不同生色团对于谱得贡献比在ORD中更容易分辨。 ORD就是渐近线,两端不回归;CD比ORD容易辨别重叠峰;CD能够提供得信息:;10、 J-810圆二色光谱仪;由CDM交互形成得左、右旋圆偏光通过光学活性物质,透射光强度随时间得变化;圆二色光谱仪工作原理;Peltier Cell Holder;The peptide bond is inherently asymmetric and is always optically active;1、氨基酸得圆二色性;2、肽得圆二色谱;Far-UV (250-170nm) Secondary Structure: α-helix, β-sheet, β-turn, random Tertiary Structure Class: all-α, α+β, α/β, all-βI, all-βII Near-UV (320-250nm): aromatic side chain Near-UV ~ Near-infrared (300-1000nm): colored proteins;苯丙氨酸( phenylalanine, Phe):255、261和268nm附近; 酪氨酸( tyrosine, Tyr) :277nm左右; 色氨酸( tryptophan, Trp) : 279、284和291nm附近; 二硫键得变化反映在整个近紫外区。 ;Far UV CD spectra of poly-L-Lys;;3、估算蛋白质二级结构含量;myoglobin;GCN4-p1; Lau, Taneja and Hodges (1984) J、Biol、Chem、 259:13253-13261;—— chymotrypsin (a