微生物的纯培养与显微技术.pptVIP

荧光显微镜 第二章 微生物的纯培养与显微技术 （一） 荧光显微技术在免疫学、环境微生物学、分子生物学中应用普遍。 第三十页，共八十二页，2022年，8月28日 各种光学显微镜的使用范围 第二章 微生物的纯培养与显微技术 （一） 暗视野显微镜：未经染色的活细胞，背景暗，标本亮，样品的轮廓、运动 普通光学显微镜：经染色的细胞，背景亮，标本暗 荧光显微镜：观察特异的细胞 相差显微镜：细胞内的细微结构 STORM（stochastic optical reconsctruc -tion microscopy，随机光学重建显微镜）荧光成像技术 突破光学衍射极限—超高分辨率 第三十一页，共八十二页，2022年，8月28日 电子显微镜 第二章 微生物的纯培养与显微技术 （一） 光学显微镜 (? = 550 nm) 的分辨率为 220 nm。电子的波长比可见光小1000倍。 第三十二页，共八十二页，2022年，8月28日 透射电镜 第二章 微生物的纯培养与显微技术 （一） 使用电子，电磁圈和荧光屏 第三十三页，共八十二页，2022年，8月28日 第二章 微生物的纯培养与显微技术 （一） 分辨率：0.2nm(理论值) 透射电镜：细胞内的超微结构 超薄切片 镜筒高度真空 透射电镜 第三十四页，共八十二页，2022年，8月28日 扫描电镜 第二章 微生物的纯培养与显微技术 （一） 经磁透镜汇集的电子探针在样品表面扫描，激发出样品释放出二次电子，根据二次电子的多少可获得样品表面的立体形貌。分辨率为10nm。 样品的表面 第三十五页，共八十二页，2022年，8月28日 扫描电镜 第二章 微生物的纯培养与显微技术 （一） 样品的表面 第三十六页，共八十二页，2022年，8月28日 扫描隧道显微镜(STM) 第二章 微生物的纯培养与显微技术 （一） 横向分辨率可以达到0.1-0.2 nm，纵向分辨率可以达到0.001 nm，是目前分辨率最高的显微镜。 样品的表面有一定的导电性； 样品的表面； 样品不受破坏。 第三十七页，共八十二页，2022年，8月28日 原子力显微镜 第二章 微生物的纯培养与显微技术 （一） 利用激光装置来检测探针和样品之间的相互作用； 适合生物材料。 第三十八页，共八十二页，2022年，8月28日 光学显微镜观察样品的制备和染色 第二章 微生物的纯培养与显微技术 （一） 直接观察活体：可以避免染色固定时对微生物结构的破坏，主要用来观察微生物的大致形态和运动情况 压滴法 悬滴法 压(埋)片法 微生物细胞一般透明 染色 第三十九页，共八十二页，2022年，8月28日 压滴法(水封片法)示意图 第二章 微生物的纯培养与显微技术 （一） 第四十页，共八十二页，2022年，8月28日 悬滴法示意图 第二章 微生物的纯培养与显微技术 （一） 第四十一页，共八十二页，2022年，8月28日 埋片法示意图 第二章 微生物的纯培养与显微技术 （一） 第四十二页，共八十二页，2022年，8月28日 染色观察 第二章 微生物的纯培养与显微技术 （一） 微生物无色透明，与背景折光率相差无几，染色可增强反差 染色前需固定 显微镜下观察到细菌的大小受固定方法影响 第四十三页，共八十二页，2022年，8月28日 固定的目的 第二章 微生物的纯培养与显微技术 （一） 杀死细菌并使菌体粘附在玻片上 增加染料对细菌的亲和力 第四十四页，共八十二页，2022年，8月28日 固定的方法 第二章 微生物的纯培养与显微技术 （一） 使蛋白质变性 加热 化学试剂：乙醇、醋酸、甲醛、戊二醛 保持细胞原来的形态，防止变形 第四十五页，共八十二页，2022年，8月28日 细菌染色法 第二章 微生物的纯培养与显微技术 （一） 活菌：美兰等 染料低毒性；能区分死活细胞 正染色：菌体着色，背景无色； 负染色则反之。 死菌：正染色 简单染色：一种染料 鉴别染色 ：两种染料不同颜色的染料，如革兰氏染色、芽孢染色、抗酸性染色等 负染色 荚膜染色 第四十六页，共八十二页，2022年，8月28日 二、微生物的纯培养技术 第二章 微生物的纯培养与显微技术 （二） 1、纯种分离技术 高密度培养 纯种培养的局限 2、纯种培养 第四十七页，共八十二页，2022年，8月28日 微生物的基本特点 第二章 微生物的纯培养与显微技术 （二） 小 培养技术在微生