- 1、本文档共23页,可阅读全部内容。
- 2、原创力文档(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
- 5、该文档为VIP文档,如果想要下载,成为VIP会员后,下载免费。
- 6、成为VIP后,下载本文档将扣除1次下载权益。下载后,不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
- 7、成为VIP后,您将拥有八大权益,权益包括:VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
- 8、VIP文档为合作方或网友上传,每下载1次, 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等,对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
查看更多
实验五细胞染色体制备;组织培养细胞染色体的制备;实验目的
实验原理
实验试剂与仪器
实验步骤
注意事项
;了解组织细胞的培养方法。
掌握染色体标本的制备方法。;二、实验原理 ;二、实验原理 ;材料:具有很强生长分裂能力的细胞系(Hela细胞、白血病K562细胞、C2C12,BHK细胞等)
仪器:恒温培养箱、离心机、显微镜
培养瓶、移液管、载玻片
试剂:培养液(RPMI1640、M199、DMEM等)、胎牛血清、双抗、NaHCO3、生理盐水、肝素、1.0g/L秋水仙素溶液(0.1%)、低渗液(0.075M/L KCl)、固定液(甲醇:冰醋酸=3:1)、Giemsa染液;1. 秋水仙素
①阻止微管组装,破坏纺锤体阻断细胞有丝分裂。
②使染色体收缩成一定的形状。
目的 : 获得大量的中期分裂相细胞。
2. Carnoy固定液
新配置的甲醇 :冰醋酸混合液 (3:1)。
能迅速穿透细胞,将其固定并维持染色体结构的完整性,还能够增强染色体的嗜碱性,达到优良染色效果 ;3. 低渗液( 0.075M/L KCl )
低渗的目的是凭借反渗透作用使细胞膨胀(但不破裂)染色体铺展,同时可使粘附于染色体的核仁物质散开,以便能在一个平面上观察所有染色体形态
4. 染料 ( Giemsa )
不是一种单一染料,而是天青、伊红、甘油和甲醇的混合物,配制后原液储存,
染色后,染色质呈红色,细胞核是蓝色。
;四、实验步骤 ;取样;预固定;三次固定(同6)
;空 气干燥;吹干;1)秋水仙素处理时间要把握好,时间过长,分裂细胞多,染色体短小;反之,则少而细长
2)低渗之后,要细心、温柔混匀细胞,防止细胞膜破裂、染色体散失;
3) 离心前配平,离心速度过高,细胞团不易打散;反之,细胞易丢失;
4) 载玻片要洁净,预冷;滴片时确定将材料滴在玻片上;;实验步骤;4. 预固定:加入3-4滴固定液后,轻轻混匀,避免粘连,1000rpm离心5min,去上清;
5. 固定:沿管壁慢慢加入3ml固定液,2min后用吸管轻轻吹打,使细胞分散,固定10min后, 1000rpm离心5min,去上清;
6. 二次固定:加3ml固定液,吹打均匀,固定10min后,1000rpm离心5min,去上清;
7. 三次固定:重复第6步;
;8. 制悬液:去上清后剩0.5ml固定液,用吸管轻轻吹???使其成为细胞悬液;
9. 滴片:将冰冷的载玻片倾斜30℃,吸取细胞悬液距离载玻片至少1m滴于载玻片上,吹散,空气干燥;
10. 染色:在干燥的载玻片上滴Giemsa,染色10min,细水冲洗后,空气干燥;
11. 镜检:在低倍镜下寻找染色体分散良好、染色适中的分裂相,油镜下观察染色体形态并计数。
;小鼠中期细胞染色体(2N=40) ;小鼠染色体核型分析;人类慢性骨髓性白血病(chronic myelogenous leukemia);感谢您的欣赏
您可能关注的文档
- 部编版人教版二年级上册语文8古诗二首.pptx
- 主题班会高三开学第一次班会高三我来了.pptx
- 老年病人的临终关怀.pptx
- 胆道系统CT诊断.pptx
- 心理健康标准.pptx
- 大地艺术景观设计.pptx
- 固体废弃物的处理和利用.pptx
- 电弧炉炼钢合理供电新技术.pptx
- 血液病常规护理.pptx
- 肿瘤靶向性药物个体化治疗李智.pptx
- 北师版七下数学3.3 用图像表示变量间的关系 同步练习(含解析).pdf
- 2024年秋福师人力资源管理学在线作业二.doc
- 2024年中石油华东企业战略规划秋季学期在线作业.doc
- 2024年材料员岗位职责.docx
- 2024年企业培训师考试题.doc
- 2024年吉林四平市事业单位招考工作人员【综合基础知识500题】高频考点模拟试题及参考答案解析.docx
- 北师版七上数学专项特训10——解特殊一元一次方程的常用技巧(课件).pptx
- 2024-2025外研版(三起)六上英语-Module 10 Unit 1I want to go to Shanghai.【课件】.pptx
- 2024年成考语文知识点汇总.doc
- 2024年半导体器件物理I复习笔记.docx
文档评论(0)