实验大肠杆菌感受态细胞的制备及转化.pptVIP

大肠杆菌感受态细胞的 制备及转化 当前第1页\共有28页\编于星期四\17点 内容一：大肠杆菌感受态细胞的制备 实验目的 实验原理 实验仪器、材料、试剂 实验步骤 1 2 3 4 注意事项 思考题 5 6 当前第2页\共有28页\编于星期四\17点 实 验 目 的 掌握感受态细胞的概念及其意义。 掌握感受态细胞的制备原理与操作方法。 当前第3页\共有28页\编于星期四\17点 实 验 原 理 感受态：受体（或者宿主）最易接受外源DNA片段并实现其转化的一种生理状态。它是由受体菌的遗传性状所决定的，同时也受菌龄、外界环境因子的影响。 制备感受态的细胞一般选择对数生长期，新鲜幼嫩的细胞是制备感受态细胞和进行成功转化的关键。常用的感受态制备方法包括KCl、CaCl2等方法；后者因为操作简便且符合大多数的分子克隆要求，因而被广泛采用。 当前第4页\共有28页\编于星期四\17点 CaCl2 法的基本原理： 细菌处于低温（0℃）和低渗的CaCl2溶液中，菌体膨胀，细胞膜的通透性发生了暂时性的改变，转化混合物中的DNA形成抗DNase的羟基-钙磷酸复合物黏附于菌体表面，在42℃进行短时间的热激处理，促进DNA的吸收。 实 验 原 理 当前第5页\共有28页\编于星期四\17点