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植物生长调节剂滇重楼组培快繁技术 云重楼是雅枫科的一种单带多年生草本植物。 利用组织培养技术可大量繁殖性状优良的幼苗,这已在多种植物上取得成功 1 材料和方法 1.1 研究资料 滇重楼种子由云南省农科院药用植物研究所提供。种子于10月份采集后,人工搓去红色外种皮,装入密封袋,置于4℃冰箱中储存4~5个月,备用。 1.2 测试方法 1.2.1 种子处理和贮藏 将经过低温处理后的种子单层平铺于培养皿中,在室温20℃下放置一段时间,待种子温度升至室温后,于红外光下照射30 min,之后转入小烧杯,向小烧杯中添加室温水(经煮沸后自然冷却至20℃的自来水),至刚好盖住种子为宜,再将小烧杯置于40℃下恒温水浴处理4 h,然后将种子转移到滤纸上,用一层纱布盖住种子,于室温下自然晾干。随机选取300粒种子分成10组,每组30粒,前5组用室温水分别保湿处理1、3、5、7、10 d,后5组分别用室温水、800 mg/L GA 1.2.2 脱脂棉和hg 选取胚根长至2 cm以上的已萌发种子,用脱脂棉蘸水擦洗表面,直至干净为止,自来水冲洗30 min后用75%酒精消毒10 min,然后用0.1%的Hg Cl 2 结果与分析 2.1 种子保湿处理 滇重楼种子经室温水保湿处理不同时间后散播于营养钵中,经培养30、60 d的萌发情况见图1。在处理过程中发现种子的颜色与体积有明显的变化,种子在40℃水浴处理4 h后依然呈浅黄色,紧皱状。经室温水保湿5 d,大多数种子吸水膨胀,呈白色;保湿7 d的种子全部吸胀,并且有少数出现萌动。从图1可以看出,萌发率最高的是保湿7 d的种子,而保湿10 d的种子萌发率低于保湿7 d的种子,其原因可能是保湿时间过长,导致种子内缺氧形成逆境所致,如果再延长保湿时间,有可能促使种子产生二次休眠。 2.2 不同的富松溶液对云南重建塔种子萌发的影响 滇重楼种子经不同保湿液处理7 d后撒播于营养钵中,其萌发结果见图2。从图2可以看出,用800 mg/L GA 2.3 不同的消毒时间对外植体的影响 种子经Hg Cl 2.4 生长迅速 从表1可以看出,种子在消毒灭菌处理以后,保留胚乳的种子在光照和黑暗条件下都能保持活性,而去除胚乳的种子则只在有光照时生长迅速。在光照条件下,保留胚乳的种子于培养15 d后开始转绿,30 d后茎秆明显伸长并且呈现绿色、但胚乳依然存在、胚芽没有伸出,60 d后随着胚乳和子叶中的营养物质的消耗,胚芽才开始长出;而去除胚乳的种子则于培养7 d后开始转绿,15 d开始展叶、茎秆伸长,30 d后形成具有单叶的完整植株、茎秆仍呈白色,60 d后膨大的根茎处开始分化出第2个芽。 3 种子萌发的影响 滇重楼种子休眠属于形态学—生理学休眠类型 外植体染菌和保持活性是在进行外植体消毒处理时必须权衡的一对重要因素,处理时间过长伤及种子内的胚芽则诱导率极低,处理时间过短则种子污染率太高。本研究初步认为用Hg Cl 在含有大量蔗糖的培养基上生长,种子很少用到胚乳中的营养物质,再加滇重楼种子的萌发是子叶出土型,胚乳和子叶的重量成为了阻碍种子发芽和茎秆伸长的一个重要因素,导致生长速度远不如去除了胚乳的种子。 利用种子萌发来获得重楼苗,是滇重楼繁殖的方式之一,但种子萌发过程需要2年时间,且子叶出土率低,不能快速获得无菌苗;利用组织培养技术,通过“芽—愈伤组织—分化芽—无根苗”