重症监护病房患者铜绿假单胞菌imp-1耐药基因检测及耐药性分析.docxVIP

重症监护病房患者铜绿假单胞菌imp-1耐药基因检测及耐药性分析 铜绿假单胞菌是临床常见的细菌之一。近年来PAE耐药率在不断增加, 已经出现一部分对三、四代头孢菌素和亚胺培南耐受的铜绿假单胞菌, 给临床治疗带来极大困难 1 数据和方法 1.1 主要仪器与试剂 收集我院2007~2009年ICU送检呼吸道标本分离出的铜绿假单胞菌。法国梅里埃公司的ATB Expression细菌鉴定仪及其配套试剂。主要仪器与试剂:PCR仪采用ABI7700, 电泳仪为美国Bio-Rad, 琼脂糖及DNA marker均购自Sigma公司, PCR试剂盒由上海生物工程公司提供。质控菌株:铜绿假单胞菌ATCC27853, 菌株购自卫生部临床检验中心。 1.2 方法 1.3 校正菌液浊度测定 挑取1~2个PAE菌落接种于5 m L MH肉汤中, 于35℃孵育6~8 h, 用生理盐水将校正菌液浊度为0.5麦氏单位后, 稀释成约1.5×10 1.4 重组病毒类 采用PCR扩增法, 选择金属酶基因IMP-1进行扩增, 其引物序列为P1:5’-CGGCC (G/T) CAGGAG (A/C) G (G T) CTTT-3’;P2:5’-AACCAGTTTTGC (C/T) TTAC (C/T) AT-3’。目的产物长度为587 bp。PCR扩增体系为:P 2 结果 2.1 药物过敏试验结果 2.23 32009年我国耐亚胺培南铜绿假单胞菌的检出情况 检出106株铜绿假单胞菌中42株是耐亚胺培南株 (占39.6%) , 2007~2009年每年检出耐亚胺培南铜绿假单胞菌株占比率依次分别是16.0%、28.3%和39.6%。 2.3 氨基丙烯酸酯pae-imp基因pcr扩增结果 42株金属酶表型阳性的PA中, 有40株扩增出IMP-1基因型, 其基因片段大小为826bp, 见图1。 2.4 金属酶检测结果 106株铜绿假单胞菌中耐亚胺培南或 (和) 头孢他啶的菌株有96株 (其中对上述两种抗生素同时耐药的有49株) , 占46.2% (49/106) , 其中产金属酶42株, 占39.6% (42/106) 。见图2。 3 耐药率及耐药菌株的选择 铜绿假单胞菌感染主要见于医院感染人群, 尤其是ICU中的重症患者, 是目前各种感染中最广泛、最严重的问题之一。随着能够水解碳青霉烯类抗生素的金属酶 (IMP) 的产生, 对碳青霉烯类抗生素及三代头孢菌素耐药铜绿假单胞菌的分离率日渐增多, 给临床抗菌治疗已带来极大的困难 本实验药敏结果显示铜绿假单胞菌对临床常用的7种抗生素均有不同程度的耐药性, 但对青霉素类抗生素 (哌拉西林、头孢拉定和头孢哌酮) 的耐药率较高, 均在40%以上;对喹诺酮类抗生素 (左氧氟沙星等) 的耐药率相对较低, 均在20%以下;而在β内酰胺类抗生素中, 耐药率最高的是对革兰阴性杆菌效果较好的碳青霉烯类抗生素亚胺培南, 2009年达39.6%, 与近年来临床上亚胺培南频繁使用而选择出耐药菌株有很大的关系。实验结果表明, 喹诺酮类抗生素和β内酰胺类抗生素仍是治疗PAE感染的有效抗生素, 可作为铜绿假单胞菌抗感染治疗时经验用药的选择依据。但是随着国内滥用抗生素亚胺培南治疗铜绿假单胞菌感染, 亚胺培南的耐药逐年上升, 尤其值得注意的是从2007年到2009年耐亚胺培南株的检出率依序分别为16.0%、28.3%和39.6%。这与国内有关于耐亚胺培南铜绿假单胞菌引起的院内感染的报道相符 耐亚胺培南铜绿假单胞菌感染ICU患者的途经大概可以概括以下几点: (1) 呼吸机途径。据报道, 气管插管及气管切开破坏了气道黏膜的正常保护作用, 增加了感染的风险 铜绿假单胞菌已成为老年ICU中耐药菌的主力。为了避免耐药, 患者在药物治疗前, 应尽快采集标本, 作药敏试验, 选择最有效的、足量的抗生素, 必要时联合使用能覆盖细菌的广谱抗生素, 同时在治疗过程中应随时监测、密切注意抗生素的敏感性变化, 调整最佳治疗方案, 注意营养支持, 缩短有创通气时间, 最大限度地减少耐药菌株的产生。只有严格进行感染患者的管理, 严格执行抗生素的管理制度, 本着对患者高度负责的态度才有可能缓解细菌的耐药趋势 严格按《全国临床检验操作规程》对送检合格的呼吸道标本进行接种、分离、培养和鉴定。 106株铜绿假单胞菌对7种抗生素的敏感率、中介率及耐药率见表1。