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imp3蛋白及ki-67在脑胶质瘤中的表达及意义 胶原肿瘤是颅内常见的肿瘤。由于血液脑屏障的特殊结构，一般化疗药物的疗效不明显。因此,脑胶质瘤治愈率差,复发率、致残率以及死亡率高,是全身恶性肿瘤中预后最差者之一。胰岛素样生长因子IImRNA结合蛋白3(insulin-likeu3000growth factoru3000IIu3000mRNA-bindingu3000proteinu30003,IMP3)是癌胚RNA结合蛋白,它在胚胎形成时调节胰岛素样生长因子II(IGF-II)的转录,在许多正常组织中的表达非常低。一些肿瘤被发现表达IMP3蛋白,包括肺癌、直肠癌、胰腺癌 虽然IMP3是近年来基础与临床的研究热点,但目前在中枢神经系统肿瘤中关于IMP3的表达研究不多,本课题研究IMP3和Ki-67在各级别脑胶质瘤中的表达以及临床意义。 1 组织学检测标准模1 选取2008年1月至2012年10月济宁医学院附属医院神经外科手术切除的脑胶质瘤组织标本60例及正常脑组织5例。其中男47例,女18例;平均年龄(47.4±9.5)岁。所有切片均经两名病理专业高级职称医师共同诊断,并参考免疫组织化学如GFAP、Olig-2、CD34、EMA、Ki-67等结果,以世界卫生组织WHO(2000)神经系统肿瘤分类标准(核异型性、核分裂象、血管增生和/或坏死),将胶质瘤分为Ⅰ~Ⅳ级。在60例胶质瘤组织标本中,Ⅰ级5例、Ⅱ级20例、Ⅲ级20例、Ⅳ级15例;其中节细胞胶质瘤3例,毛细胞星型细胞瘤2例,弥漫型星型细胞瘤21例,少突胶质细胞瘤15例,间变型室管膜细胞瘤4例,胶质母细胞瘤15例。 1.2 仪器、仪器和仪器 石蜡切片 机LEICA-RM2245(德国 );YFTFB型生物组织摊烤片机(湖北孝感亚光医疗电子有限公司);KB-TK-72精密烤箱(东莞科宝);家用微波炉(美的);冰箱BCD-206TS(青岛Hair);隔水式电热恒温箱(上海);微量移液器(上海大迈仪器有限 公司 );光学照相 显微镜 (LEICADM2500德国);WMY-01数显温控 仪 (上海);101-A型数显电热鼓风干燥箱(北京永光明医疗仪器厂);高清晰度彩色病理图片分析系统(西安华海HMIAS)。 1.3 ab显色试验 鼠抗人IMP3单克隆抗 体 (英国DAKO公司);免疫组化试剂盒(SP)(北京中杉生物技术有限公司);DAB显色试剂盒(北京金桥生物技术有限公司);APES北京中杉金桥生物技术有限公司;缓冲液 (0.05M PBSu3000pHu30007.4缓冲液,0.05M pH6.0柠檬酸缓冲液)、梯度酒精(100%、95%、90%、80%、70%)、二甲苯、松节油、甘油、丙酮、过氧 化氢、碳酸氢二钠、苏木精、伊红染液等。 1.4 u3000db-4-imp-3,5-二显色改性 1)石蜡切片,厚4μm,将石蜡组织片贴附于防脱多聚赖氨酸载玻片上,置于60℃烤箱中烤片1h,取出备用。2)石蜡切片脱蜡。3)将切片置于3%过氧化氢中,10min后取出,以阻断内源性过氧化物酶PBS冲洗3次,每次5min。4)对组织抗原进行修复,取一定量EDTA缓冲液(pH=9.0)于抗原修复盒中,将组织切片置于塑料切片架上,微波炉中火修复10min,取出,冷却至室 温。之后用PBS洗3次,每次5min。5)甩去切片PBS液,每张切片加50μlu3000IMP-3(1∶50稀释),37℃下静置1h。6)用PBS液冲洗3次,每次5min。7)甩去切片PBS液,每张切片 加Envisionu3000DAB-Au300050μl37℃烤箱中静置30min或者室温 下静置1h。8)PBS液冲洗3次,每次5min。9)甩去切片PBS液,每张切片加100μlu3000DAB显色剂工作液(DAB-B液与DAB-C液比例为50∶1,避光,用前30min配制)。镜下观察3~10min,阳性显色为棕黄色颗粒。10)用蒸馏水冲洗10min,苏木素复染2min,1%盐酸酒精分化,自来水冲洗10~15min。11)脱水,透明,封片,镜检。 1.5 ki-97指数 IMP3阳性细胞百分比评分:阴性 (-),未见着色细胞;弱阳性(+),着色细胞数25%;中度阳性 Ki-67蛋白一般采用Ki-67指数(Ki-67LI)表示细胞的增殖程度,高倍镜 (×400)下每个视野数200个瘤细胞,计算其阳性细胞所占百分比。阴性(-),着色细胞 5%;弱阳性 (+),着色细胞 数5%~10%;中度阳性 1.6 统计方法u3000 所有数据采用SPSS13.0处理,应用χ 2 u3000的结果 2.1 脑胶质瘤imp3表达强度 IMP3蛋白主要表达于细胞质内,以细胞质内出现棕黄色颗粒为阳性,在正常脑组织中无表达,在胶质细胞瘤Ⅰ级未见有表达