galecin-7和mmp-9在食管鳞癌组织中的表达及意义.docxVIP

galecin-7和mmp-9在食管鳞癌组织中的表达及意义 癌症是人类常见的肿瘤之一。在中国大陆地区, 食管癌的主要类型为鳞状细胞癌, 发病率居全国恶性肿瘤第五位, 死亡率居第四位 1 材料和方法 1.1 材料表面 1.1.1 病例选择及术后随访 收集重庆医科大学附属第一医院胸外科2012年3月至2013年3月50例食管鳞癌者术后标本, 同时收集其中38例距癌组织5 cm以外的食管上皮组织。其中男性38例, 女性12例, 年龄44岁~83岁, 平均年龄60.12岁;美国肿瘤联合会 (American Joint Committee on Cancer) 食管癌TNM临床分期 (2010年标准) :I期11例, II期20例, III期19例;组织分化程度中低分化35例, 高分化15例;伴有淋巴结转移者27例, 无转移者13例;有侵及外膜者23例, 无外膜侵及者27例, 排除身体其他部位原发性肿瘤。所选患者术前均未使用化疗药物及免疫增强药物, 患者术后第1年, 每3个月复查胸部增强CT、全身骨显像、头颅CT、腹部彩超等以判断是否出现复发转移。术后第2年, 每半年复查一次。患者随访时间12~24个月, 平均随访时间16.5个月。 1.1.2 mmp-9蛋白多克隆抗体 兔抗人Galectin-7蛋白多克隆抗体、兔抗人MMP-9蛋白多克隆抗体均购自Proteintech公司。二抗山羊抗兔SABC试剂盒及DAB染色试剂盒购自武汉博士德公司。 1.2 方法 1.2.1 in-7一抗、兔抗人mmp-9 免疫组化采用链霉亲和素–生物素复合物法 (strept avidin-biotin complex, SABC) , 兔抗人Galectin-7一抗、兔抗人MMP-9一抗均以1:200比例稀释, PBS代替一抗作为阴性对照。使用Image Pro Plus软件观察免疫组化染色结果, 采用二级计分法:阳性细胞数5%为0分, 5%~20%为1分, 20%~50%为2分, 51%~75%为3分, 75%为4分;阳性强度:淡黄色为1分, 棕黄色为2分, 棕褐色为3分, 不着色为0分。两者分数相加, 3分为阴性 (–) , ≥3分为阳性 (+) 1.2.2 资料统计分析 应用SPSS 17.0统计软件对数据进行分析处理, 蛋白表达比较用卡方检验, 配对资料的相关性分析采用Pearson检验。平均光密度值以均数±标准差表示, 两组间比较采用t检验, 相关性采用Spearman相关性分析。对诊断方法的判断使用ROC曲线分析。均以P0.05为差异有统计学意义。 2 结果 2.1 galectin-7,mmp-9在因变量和细胞浆中表达 免疫组化结果显示, Galectin-7阳性染色表现为淡黄色至深棕色颗粒, 定位于细胞浆。MMP-9阳性染色表现淡黄色至棕褐色颗粒, 定位于胞浆及间质 (图1和图2) 。食管鳞癌组织Galectin-7、MMP-9表达阳性率高于癌旁组织, 差异有统计学意义 (表1) 。Galectin-7、MMP-9在食管鳞癌组织中的平均光密度值与癌旁组织中的平均光密度值差异有统计学意义 (表2) 。 2.2 galectin-7和mmp-9的发现与残留动物的临床病理参数之间的关系 食管鳞癌中, Galectin-7表达阳性率在有淋巴结转移病例中明显高于无淋巴结转移病例 (χ 2.3 各因素的相关性 对Galectin-7和MMP-9的表达进行的关联性分析 (Pearson关联性分析) , 结果呈显著正相关性 (r=1.000, P=0.000) (表5) 。对MMP-9和Galectin-7表达的平均光密度值进行Spearman相关性分析, 结果 (r=0.430, P=0.002) 与Pearson关联性分析一致, 二者表达呈正性相关。 2.4 galec-tin-7和mmp-9在术后一年内发生时间 50例患者中, 19例术后出现复发转移, 其中复发伴肝转移2例, 复发伴肺转移5例, 复发伴骨转移2例, 纵隔淋巴结转移3例, 复发伴胸膜转移1例, 吻合口复发6例。其中I期0例, II期3例, III期9例。12例复发转移均发现于术后一年以内 (第6~12月) , 平均发生时间为第10.25月, 截止最后一次随访日 (2014-04-02) , 已有7例患者死亡。19例复发转移患者Galec-tin-7和MMP-9表达均阳性, 单阳性患者及双阴性患者均未出现复发转移。将Galectin-7和MMP-9的平均光密度值做为预测术后早期复发的检测指标, 通过ROC曲线分析 (图3) , Galectin-7的灵敏度为89.5%, 特异度为71%;MMP-9的灵敏度94.7%, 特异度为77.4%;联合MMP-9和Galectin-7的灵敏度为9