Cre重组酶结构与功能的研究进展.docxVIP

18 卷 5 期 生 物 工 程 学 报 vol. 18 No. 5 2002 年 9 月 chinese Journal o∫ Biotechnology September 2002 cre 重组屯结构与功能的研究进展 王立霞 王 勇 胡莺雷 高 音 林忠平* （北京大学蛋白质工程及植物基因工程国家重点实验室 北京 100871） 摘 要 cre/loxP 定位重组系统来源于嗤菌体 P1 ，由 cre 重组屯和 loxP 位点两部分组成。在 cre 重组屯的介导下， 设定的 DNA 片段可以被切除，可以发生倒位，亦可造成定点的整合。 由于其作用方式高效简单，cre/loxP 定位重组 系统已在特定基因的删除、基因功能的鉴定、外源基因的整合、基因捕获及染色体工程等方面得到了有效的利用， 在转基因的酵母、植物、昆虫、哺乳动物的体内外 DNA 重组方面成为一个有力的工具。这里就 cre 重组屯的结构、 功能及该定位重组系统的应用等方面的研究进行了综述。 关键词 cre 重组屯，loxP 位点，定位重组 中图分类号 Q55 文献标识码 c 文章编号 1000-3061（2002）05-0531-05 DNA 的重组是生命世界普遍发生的现象，它对生命表 现形式的多样化具有重要意义。然而 DNA 在什么情况下重 组、重组过程遵循什么样的规律，迄今为止知之甚少。 比较 简单的一类重组现象称为定位重组（Site specific recombina- tion），已经研究得比较清楚，并且发挥了它在 DNA 修饰技术 中的一系列作用[1]。 定位重组系统是由单个多胁屯识别特定的 DNA 序列而 发生重组的遗传操作系统，现已成功地应用于高等动植物基 因组的修饰。研究较多的 4 种定位重组系统是来源于嗤菌 体 P1 的 cre/loxP 系统、酿酒酵母（saccharomyces cerevisiae）2μ 质粒的 FLP/FRT 系统、接合酵母（zygosaccharomyces rouxii）pSR 质粒的 R/RS 系统，以及嗤菌体 Mu 的 Gin/gix 系统[2]，每种重 组系统都主要由 2 个组分组成：重组屯和特异性识别位点。 由于这类定位重组系统重组方式的确定性和精确性，它们在 基因控制上具有很大的应用价值。其中以 cre/lox 定位重组 系统的应用最为广泛。 来源于嗤菌体 P1 的 cre/loxP 系统包含有 2 个重要的组 成：一个是 loxP 位点，另一个是识别 loxP 位点的 cre 重组屯。 该系统在嗤菌体 P1 与宿主细胞相互作用中起着非常重要的 作用，它能维持 P1 在宿主细胞中的低拷贝数，保持宿主细胞 分裂之后仍含有一个拷贝的 P1 基因组；另外它还有助于在 感染组织中使嗤菌体 DNA 迅速环化[3] 。下面先介绍该系统 的 2 个组成元件。 1 第一个组成元件—cre 重组蘸 cre 是一种蛋白质，其名称来源于 cause recombination，是 从嗤菌体 P1 中提取出来，由嗤菌体 P1 基因组编码的。依据 氨基酸序列的同源性，来自细菌和酵母的重组屯可以分为整 合屯家族和解离-转化屯家族，cre 重组屯是整合屯家族的一 员。整合屯家族重组屯的共同特点是这些屯均由单个多胁 构成，作用于核昔酸序列时，不需要其它辅助因子的参与，也 不额外消耗能量[2] 。因这种 DNA 重组过程容易在离体条件 下（in vitro）发生，为研究 cre 重组屯结构与功能关系提供了 有利条件。上述几种定位重组系统中重组屯之间在氨基酸 序列上差异较大，但它们在 c-末端都具有一个“R-H R Y ” （Arg-His-Arg-Tyr）的四联体结构，是整合屯的活性中心。其 中第 324 位的酪氨酸 Tyr324 和 DNA 分子共价结合，形成 3,- 磷酸酪氨酸，将 DNA 链切割；碱性氨基酸 Arg173、His289、 Arg292 在重组反应中起到中和与稳定反应体系中高浓度负 电荷的作用[4]。 1. 1 cre 重组屯的理化特性 cre 重组屯是由嗤菌体 P1 基因组中 1029bp 的一段序列 编码的蛋白质，由 343 个氨基酸组成，分子量为 38 . 5KD