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? ? 不同品种藜麦的RAPD分析 ? ? 郭晓丽，吕亚慈，时丽冉，张 欢，魏 莹 不同品种藜麦的RAPD分析 郭晓丽，吕亚慈，时丽冉，张 欢，魏 莹 （衡水学院 生命科学学院，河北 衡水 053000） 藜麦蛋白含量高，营养价值丰富，受到国内外学者的广泛关注。为进一步研究藜麦种质资源的遗传特性，本实验以9个藜麦品种为材料，采用46个随机引物对不同藜麦品种的基因组DNA进行RAPD分析。实验结果表明：通过PCR扩增，一共获得了372条扩增条带，其中多态性条带134条，多态性比例为36%。由聚类分析发现9个藜麦品种之间的遗传相似系数在0.530～0.804之间。同时，9个藜麦品种可以划分为4类。第一类为QA13-8和SCL；第二类为QA13-13-1-23，它与其他品种的遗传距离较远；第三类为黄藜1号和土黄藜；第四类为红藜、黄藜、YY-6-6-Z、QA13-8-1-15。 藜麦；基因组DNA；RAPD；聚类分析 藜麦（Chenopodium quinoa Wild），又名南美藜、藜谷等，是南美洲安第斯山一种传统的农作物。藜麦的蛋白质含量高，富含钙磷铁等元素，有“养分黄金”和“有机谷类之王”等美称[1]。藜麦不但营养成分含量高，还有许多生物学功效。比如藜麦含有丰富的维生素，在预防衰老、抗氧化等方面具有突出作用[2]。胡一晨等通过研究发现藜麦中的非淀粉类多糖可以有效地起到降血糖、降血脂作用[3]。近年来藜麦蕴含的价值激发了研究者的极大兴趣，目前藜麦的研究主要集中在其生物学特征、化学组成成分、生理学功效等方面[4]。因为藜麦种类较多，要想通过传统形态学标识标记等方法来进行藜麦的选种育种存在一定的困难，而分子标记技术是目前最理想的标记手段，分子标记手段克服了传统遗传研究方法程序繁杂和易受外界因素干扰等缺点而使其在遗传图谱构建、基因定位和分子标记辅助育种等方面得到普遍的应用，展现出良好的应用前景。 随机扩增多态性DNA（RAPD）技术是1990年发明的一种建立于PCR基础上的可以对未知序列的基因组进行多态性分析的分子标记技术[5]。RAPD技术快捷便利，不需要经过分子杂交这一操作，并且随着反应体系的不断优化和检测手段的相应进步，加之目前RAPD方法可大规模自动化分析样品，RAPD辅助选择育种和其他相关应用研究更为深入彻底，现已广泛应用于小麦[6]、玉米[7]、水稻[8]等作物的系谱分析、品种鉴定及亲缘关系分析。 本研究以9个不同品种藜麦为材料，采用46种随机引物，分别对不同藜麦基因组DNA进行RAPD分析，进而分析藜麦不同品种间的遗传关系，从而为藜麦种质资源的开发和利用奠定基础。 1 材料与方法 1.1 材料 9个藜麦品种分别为：QA13-8、QA13-13-1-23、SCL、黄藜1号、土黄藜、红藜、黄藜、YY-6-6-Z、QA13-8-1-15（依次编号为1—9），由张家口市农科院提供。 1.2 方法 1.2.1 植株培养 挑选不同品种藜麦种子各50粒，用0.1%氯化汞消毒10 min，经去离子水冲洗干净后，放于装满蛭石的器皿中，然后再铺盖一层蛭石并加入适量蒸馏水，放在通风良好的环境中进行培养并定期浇灌营养液。待藜麦植株生长到10 cm左右，选取幼嫩的叶片，放入－70 ℃的冰箱中保存备用。 1.2.2 基因组DNA提取 采用SDS法提取藜麦基因组DNA[9]。 1.2.3 基因组DNA检测 通过琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测，测定不同品种藜麦基因组DNA的浓度和纯度，并将所有样品的质量浓度稀释至50 ng/uL备用。 1.2.4 RAPD-PCR扩增 采用10 uL 的PCR反应体系为：10*Buffer 1 uL；Mg2+1 uL；dNTP 1 uL；Primer 0.5 uL；Taq E 0.1 uL；DNA（50 ng/uL）2 uL；H2O 4.4 uL。扩增步骤：94 ℃，5 min；（94 ℃，1 min；72 ℃，1.5 min），45个循环；72 ℃，5 min；4 ℃保存备用。RAPD扩增产物用质量分数为1.5%的琼脂糖凝胶上进行电泳，凝胶成像仪上进行扫描拍照。 1.2.5 数据统计分析 采用Excel软件整理记录最初的条带数据，统计出每个引物所扩增出的总条带数和多态性条带数，从而算出多态性位点的百分比。采用NTSYS 2.10e软件进行聚类分析来判定不同品种藜麦间的遗传关系。 2 结果与分析 2.1 不同品种藜麦基因组DNA的检测 通过琼脂糖凝胶电泳对9种不同品种藜麦的基因组DNA进行检测，如图1所示，所提取的藜麦基因组DNA条带清晰完整，DNA一致性较好，可用于后续PCR扩增。 注：从左到右依次为品种1至9。 2.2 不同品种藜麦RAPD-PCR分析 以不同品种藜麦的基因组DNA为模板，利用46个随机引