不同品种蝴蝶兰耐冷性评价.docxVIP

? ? 不同品种蝴蝶兰耐冷性评价 ? ? 冯小璐，孔艳娥，孙 音，姜楠南，房义福，李月苓，牛晓华 （1中国农业大学烟台研究院，山东烟台 264670；2商河县国家农业科技园区服务中心，济南 251600；3山东省林业科学研究院，济南 250014；4济南市林果技术推广和产业服务中心，济南 250099；5济南文旅花木开发有限公司，济南 250103） 0 引言 兰科蝴蝶兰属植物蝴蝶兰(Phalaenopsis amabilis)原产于热带亚洲至澳大利亚，已发现70多个原生种[1-2]，中国有12种。蝴蝶兰为多年生附生草本，花型似蝶、花色丰富、花期长，有‘兰花皇后’之称[3]。但其最适生长温度为18～28℃，在低于10℃的环境中易受冷害[4]。本研究采用逐步降温的方式，通过测定16个蝴蝶兰品种在不同低温胁迫下相关各项生理指标的变化特征，研究不同品种蝴蝶兰在低温逆境下的生理差异，结合叶片形态特征，对不同品种蝴蝶兰的耐冷性进行综合评价，以期为蝴蝶兰抗冷栽培抗冷品种选育及抗冷生理机理研究提供理论基础。 1 材料与方法 1.1 试验材料 从济南麒麟花卉有限公司购进16个蝴蝶兰品种，分别为‘婚宴’、‘大辣椒’、‘花样年华’、‘阿里山’、‘红蝴蝶’、‘黑闪电’、‘满天红’、‘红冠天’、‘一见钟情’、‘蜡红花’、‘冰山美人’、‘1372’、‘富乐之星’、‘黄金甲’、‘5064’、‘wk1753’，每个品种25株，植株生长期约400天，生长势基本一致，健壮无病虫害。 1.2 试验方法 采用逐步降温法进行抗冷试验。置于昼夜温度为25℃/22℃、相对湿度(RH)60%～70%、光照时间昼夜为12 h/12 h、白昼光强为12000 lx的人工气候箱中培养1天，然后将昼夜温度均调为18℃/15℃预处理3天。胁迫温度逐级递减，分别为10℃/3天、8℃/3天、6℃/3天，之后将培养箱温度调为昼夜温度18℃/15℃预恢复3天，最后转入昼夜温度为25℃/22℃的培养箱中恢复4天。试验过程中，除处理温度改变，其他条件均一致。在25℃/22℃培养1天时、10℃处理3天时、8℃处理3天时、6℃处理3天时、恢复7天时，各品种分别选取5株进行试验，每株均选择从上到下第一片成熟叶片进行叶绿素荧光参数及各项生理指标的测定，分别记为1、7、10、13、20天。 1.3 叶绿素荧光参数的测定 叶绿素荧光参数采用英国Hansatech公司的FM-2便携式脉冲调制式荧光仪进行测定，每个品种测定5株，叶夹夹在叶片中部暗适应30 min后测定。 1.4 生理指标测定方法 相对电导率(REC)采用电导法[5]，采集5个叶片混样测定，重复3次。 叶绿素含量测定采用95%乙醇提取法[5]，采集5个叶片混样测定，重复3次。 称取5个叶片的混样0.5 g放入提前低温预冷的研钵中，加入1 mL磷酸缓冲液(pH 7.8，0.05 mol/L)，冰浴研磨后再加入4 mL磷酸缓冲液，低温(0～4℃)、12000 r/min离心20 min，取上清液冷藏保存(4℃)，用于测定过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)的含量。SOD活性测定采用NBT法[6]，CAT活性测定采用过氧化氢氧化法[6]，MDA含量测定采用硫代巴比妥酸法[6]。3次重复。 1.5 数据分析 使用Excel 2010软件进行数据处理，使用SPSS 21软件对原始数据进行标准化与聚类分析。用模糊隶属函数法对恢复生长后各项指标的变化率进行耐冷性综合评价[7]。采用灰色关联法分析隶属函数平均值与各指标变化率的关联程度。 2 结果与分析 2.1 低温胁迫对蝴蝶兰叶片形态的影响 6℃处理结束且恢复生长后‘，阿里山’的嫩叶出现黄化症状‘，花样年华’仅有极少数嫩叶出现腐烂冻斑，‘婚宴’的部分嫩叶出现褪绿条纹‘，一见钟情’整株叶片颜色变浅但无黄化、冻斑出现‘。黄金甲’整株叶片褪绿，接近一半的叶片褐化萎蔫‘；红蝴蝶’大部分叶片出现大范围褪绿、黄化，部分叶片出现面积较大冻斑‘；红冠天’整株出现大面积腐烂冻斑，甚至死亡‘，wk1753’与‘冰山美人’整株萎蔫死亡（图1D、H）。其余品种在6℃处理结束且恢复生长后，嫩叶黄化或褐化萎蔫，部分老叶出现冻斑。 图1 低温胁迫对蝴蝶兰叶片形态的影响 2.2 低温胁迫对蝴蝶兰叶片叶绿素荧光参数的影响 PSⅡ反应中心存在可逆失活、不可逆转的破坏或类囊体膜损伤都可导致Fo（初始荧光）数值上升[8]。从图2可知，总体而言，随着温度的降低与处理时间的延长，不同蝴蝶兰品种的Fo均升高。6℃处理结束后（13天）‘，黄金甲’、‘5064’的Fo升幅达到300.00%以上，而‘花样年华’Fo升幅仅为8.22%，其余品种Fo升幅在10.00%～300.00%之间。说明在低温胁迫下，不同蝴蝶兰品种类囊