脑溢安对出血性中风大鼠脑内磷酸化蛋白激酶表达的影响.docxVIP

脑溢安对出血性中风大鼠脑内磷酸化蛋白激酶表达的影响 丝裂原激活的蛋白激酶（mk）级联导思想，促进了各种细胞的生理过程，如细胞生长、发育、分裂、死亡和细胞间功能障碍的同步。 1 1.1 动物 雄性SD大鼠, 45只, 体重 (250±20) g, 由湘雅医学院实验动物中心提供。 1.2 免疫组织化学 脑溢安浸膏粉, 由湘雅医院药剂科监制, 生产批号:990310。鼠抗63号丝氨酸残基上已磷酸化的C-Jun单克隆抗体, 美国Santa Cruz生物技术公司生产, ABC免疫组化试剂盒, Vector公司产品。Ⅶ型胶原酶为Sigma公司产品。其余试剂为市售分析纯。 1.3 仪器 日本Olympus光学显微镜。美国STOELTING TL-2鼠脑立体定位仪。 1.4 动物模型 参照Rosenberg 1.5 灌胃时间及液体量 40只大鼠随机分成模型组和脑溢安治疗组, 每组20只大鼠, 每组各设4个时间点, 每个时间点5只大鼠。模型组术前2 h用灭菌生理盐水2 ml灌胃, 术后动物清醒开始, 生理盐水灌胃剂量为4 ml/d, 分2次进行。脑溢安治疗组灌胃用脑溢安浸膏粉稀释液 (4 ml液体含浸膏粉1.23 g, 相当于生药11.37 g) , 灌胃时间及液体量同模型组, 用药量按体表面积计算为临床70 kg成人用量的3倍, 相当于脑溢安浸膏粉4.92 g/ (kg·d) 灌胃。设正常对照组5只, 动物均任其自由饮水进食, 保持室温20~25 ℃。 1.6 c组患者机切片 为检测脑内磷酸化C-Jun的蛋白表达变化, 大鼠经10%水合氯醛腹腔注射麻醉, 用4%多聚甲醛心内灌注固定后取出全脑, 从注射针刺点附近切开暴露出血面, 前囟后3.4 mm切开暴露海马平面, 分别石蜡包埋切片。以血肿为中心冠状切取5 μm厚连续切片。切片常规脱蜡至水, 2%H 1.7 统计处理 数据用均数±标准差 2 2.1 切片观察和阳性染色神经元 每个时间点观察5只大鼠共切片5张, 每张切片用400倍光镜随机数3个视野, 5张切片共15个视野, 观察梨状皮质内阳性染色神经元数, 阳性染色神经元数以均数±标准差 2.2 脑溢安对受损神经元数目的影响 正常组大鼠未见神经元受损, 脑出血后6 h, 脑皮质可见少量损伤神经元, 脑出血1 d后, 受损神经元的数目明显增加, 脑溢安可明显减少受损神经元的数目 ( 3 mapk信号转导通路 在某些细胞类型JNK被有丝分裂原激活, 介导细胞分化与增殖, 但通常而言, JNK主要被应激刺激和病理性损伤信号所激活, 介导细胞凋亡反应。MAPK信号转导通路与脑缺血损伤密切相关。Herdegen 脑溢安是治疗脑出血的三类新药, 目前正进行Ⅱ期临床观察研究, 该药由羚羊角、钩藤、丹皮、大黄等组成, 具有平肝熄风、凉血泻火等功效。以往的研究已证明, 脑溢安能抑制脑出血后的细胞凋亡