pwax柱固相萃取-高效液相色谱法检测食品中多种合成着色剂.docxVIP

pwax柱固相萃取-高效液相色谱法检测食品中多种合成着色剂 食品中使用的八种合成色胺是由焦油从焦油中分离得到的，属于偶氮化合物。 合成着色剂测定方法有高效液相色谱 (HPLC) 法、薄层色谱法、示波极谱法等, 因HPLC的普及, 该方法被广泛使用。国标及文献报道 1 材料和方法 1.1 合成阴离子及萃取柱 U3000型液相色谱仪 (美国ThermoFisher) ;PWAX固相萃取柱 (天津博纳艾杰尔科技) :弱阴离子150mg/1ml;液相色谱柱Innoval C 1.2 标准储备液和标准工作溶液的配制 甲醇色谱纯;乙酸锌溶液 (1.0mol/L) :称取22g乙酸锌, 用水溶解并定容至100ml;草酸钾/磷酸氢二钾溶液:称取3.0g草酸钾和7.0g磷酸氢二钾, 用水溶解并定容至100ml;柠檬酸溶液:称取20g柠檬酸, 用水溶解并定容至100ml;氨水溶液 (5%) :取5ml氨水用水定容至100 ml;pH6水溶液:水加柠檬酸溶液调pH值至6;氨化甲醇溶液 (3%) :取3ml氨水加入到97ml甲醇中;乙酸铵溶液 (0.02mol/L) :称取1.54g乙酸铵用水溶解并定容至1 000ml, 过0.45μm滤膜;合成着色剂标准品:柠檬黄标准储备液 (0.5mg/ml) 、苋菜红标准储备液 (0.5mg/ml) 、胭脂红标准储备液 (0.5mg/ml) 、日落黄标准储备液 (0.5mg/ml) 、诱惑红标准储备液 (1.0mg/ml) 、亮蓝标准储备液 (0.5 mg/ml) 和赤藓红标准储备液 (1.0mg/ml) (购自中国计量科学研究院) , 酸性靛蓝固体标准品 (纯度≥99.9%, 购自Dr.Ehrenstorfer公司) ;超纯水。 标准溶液配制:酸性靛蓝标准储备液 (0.5mg/ml) :准确称取适量酸性靛蓝固体标准品, 用水溶解并定容。混合标准应用液 (100μg/ml) :分别移取适量合成着色剂标准储备液, 用水定容。混合标准系列:准确移取适量混合标准应用液 (100μg/ml) , 用水配制成0.2μg/ml、0.5μg/ml、2.0μg/ml、5.0μg/ml、10μg/ml和20μg/ml的混合标准系列。 1.3 样品处理 1.3.1 样品处理和净化 液体饮料、液体调味料、果汁、配制酒类、蜜饯、糖果、果冻等:称取2g样品于15ml聚丙烯刻度离心管中 (含二氧化碳的样品可超声波超声15 min除去二氧化碳;酒类加热除去乙醇;固体样品加20ml水, 加热溶解样品, 蛋白质含量高的样品加1ml乙酸锌溶液和1ml草酸钾/磷酸氢二钾溶液, 充分漩涡混匀。) 用氨水溶液调pH至6左右, 用水定容至10 ml, 10 000r/min离心5min, 上清液待净化。 玉米粉、小米和小米粉等:称取2g粉碎后样品于50ml聚丙烯刻度离心管中, 加10ml氨化甲醇溶液, 漩涡混匀1 min, 超声提取15 min, 4 000r/min离心3min, 上清液转移至试管中;样品残渣用氨化甲醇溶液重复提取至提取液无色, 合并提取液于60℃水浴氮吹近干, 用水定容至10 ml, 10000r/min离心5min, 上清液待净化。 番茄酱等调味品:称取2g样品于50ml聚丙烯刻度离心管中, 加10 ml氨化甲醇溶液, 漩涡混匀1 min, 超声提取15 min, 4 000r/min离心3min, 上清液转移至试管中;样品残渣用氨化甲醇溶液重复提取至提取液无色, 合并提取液于60℃水浴氮吹近干, 用水定容至10ml, 10 000r/min离心5min, 上清液待净化。 肉制品:称取2g均质后样品于50ml聚丙烯刻度离心管中, 加20ml石油醚, 漩涡混匀1min, 4000r/min离心3min, 弃去石油醚层, 残渣重复上述过程去脂3次;向样品残渣中加10ml氨化甲醇溶液, 漩涡混匀1min, 4 000r/min离心3min, 上清液转移至试管中;样品残渣用氨化甲醇溶液重复提取至提取液无色, 合并提取液于60℃水浴氮吹近干, 用水定容至10ml, 10 000r/min离心5min, 上清液待净化。 1.3.2 固相萃取柱的制备 预先用6ml甲醇和6ml水活化PWAX固相萃取柱, 取5 ml上述样品提取液, 以1ml/min的速度通过预先活化后的PWAX固相萃取柱;再分别用6ml pH6水溶液和6ml甲醇淋洗固相萃取柱, 将固相萃取柱通入空气吹干;最后用6ml氨化甲醇洗脱并收集, 60℃水浴氮气吹近干, 加1ml水复溶, 若溶液浑浊, 可10 000r/min离心10min, 上清液待上机测定。 1.4 条件1 色谱柱C 2 结果 2.1 回收率、精密度、标准曲线 在1.4色谱条件下检测, 柠檬黄、苋菜红、酸性靛蓝、胭脂红