《遗传学》课件-第4章转基因的原理和方法 4.pptxVIP

第四章 转基因的原理与方法;本章内容;理论基础;①从细胞中分离出DNA;第一节 植物转基因的原理方法;植物转基因育种的程序;（一）目的基因的获得;1.根据氨基酸序列进行基因克隆;(2)同源序列法 (Homology Based Candidate Gene Method) ;2、根据核酸序列进行基因克隆;mRNA;(2)根据连锁图谱克隆目的基因 图位克隆技术(Map-based cloning);(3)转座子标签法;插入 突变体;(4)差异显示法;叶mRNA ;(5) cDNA微阵列, cDNA 芯片;(6) 电子克隆 in silico cloning;（二）重组质粒的构建;分离 基因;基因克隆载体(Gene cloning vector);1、载体的选择;大肠杆菌质粒载体;pUC18/19;农杆菌Ti质粒;多克隆 位点;野生型Ti质粒直接作为植物基因工程载体，存在如下障碍;双元载体系统binary Ti vector system;2、标记基因的选择;标记基因必须具备五个条件;报告基因:;;GFP（绿色荧光蛋白基因）; LUC (萤火虫荧光素酶基因);;3、启动子的选择;（三）受体材料的选择与准备;1.愈伤组织再生系统;;生长素与细胞分裂素的比值是根和芽形成的控制条件，决定着发育的方向:是愈伤组织、长根还是长芽。 高 利于根的形成 生长素/细胞分裂素 适中 利于愈伤组织的形成 低 利于芽的形成;2.直接分化再生系统;3.原生质体再生系统;4.胚状体再生系统;（四）转基因方法;1.载体介导转移系统;(1)叶盘法;(2、3、4);2.外源基因直接导入法;1.Pericarp should be pulled back and the immature embryos(0.5-1.0mm) are removed. ;;(3)显微注射法;几种植物转基因方法比较;（五）转化体的筛选和鉴定;2.转化体的鉴定;;(2) 转录水平的鉴定;（3）翻译水平的鉴定;（六）转化体的安全性评价和育种利用;(七)、转基因作物的遗传特点;整合后外源基因表现: 不表达 1、基因丢失 2、基因沉默 表达 1、符合孟德尔遗传 2、独立转化体之间差异 3、无规律;第二节、动物转基因的原理方法;（二）重组质粒的构建：动物病毒载体;（三）受体材料;（四）转基因的方法;三种转基因方法的比较;通过逆转录病毒载体获得转基因小鼠;显微注射法建立转基因小鼠的实验程序;;转基因动物的应用;转基因牛羊;; 就到这里了！