DB37T 575-2005饲料中氯羟吡啶的测定 高效液相色谱法.pdf

ICS65.120B20DB37备案号山長东省地方标准DB37/T575—2005饲料中氯羟吡啶的测定高效液相色谱法Determination of clopidol in FeedsHighPerformance Liquid Chromatography2005-××-××发布2006-03-01实施山东省质量技术监督局发布 DB37 /T575—2005前言本标准由山东省畜牧办公室、山东省畜牧业标准化技术委员会提出，本标准负责起草单位：山东省饲料监察所。本标准主要起草人：李俊玲、强莉、宫玲玲、刘华阳、王琳、李会荣。1I DB37 /T575—2005饲料中氯羟吡啶的测定一高效液相色谱法1范围本标准规定了用高效液相色谱仪测定饲料中氯羟吡啶的方法本标准适用于配合饲料、浓缩饲料及添加剂预混合饲料中氯羟吡啶的测定，最低定量限为10mg/kg.2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3方法原理试样中的氯羟吡院用甲醇提取，提取波经净化，在HPLC反相柱上分离，紫外检测器270nm处测定，试剂和溶液除非另有说明，本标准所用试剂为分析纯，色谱用超纯水符合GB/T6682一级水的规定。4. 1甲醇。4. 2甲醇：色谱纯，过0.45m有机系滤膜。4.3乙睛：色谱纯，过0.45μm有机系滤膜。4.4磷酸氢二钠：优级纯。4.5磷酸二氢钾：优级纯。4. 6HPLC流动相4. 6.1磷酸盐缓冲溶液称取2.09克磷酸氢二钠（4.4）和1.40克磷酸二氢钾（4.5）溶于超纯水中，调节pH=7，并定容至500mL。过0.45μm水系滤膜4. 6. 2：HPLC流动相：磷酸盐缓冲溶液（4.6.1）十乙睛（4.3）=85十15。混合，脱气后备用。4.7氯羟吡啶标准溶液4.7.1氯羟吡啶标准贮备液称取氯羟吡啶纯品（含量不少于99.8%）10mg（准确至0.1mg），用甲醇（4.2)溶解并定容至100ml。其浓度为100μg/mL，烂存于0℃-8冰箱中。溶液有效期1个月。4.7.2氯羟吡啶标准工作液精密量取标准贴备液(4.7.1)1.00ml，用甲醇(4.2)定容至10ml。该溶液浓度为10μg/mL。现用现配.4.7.3标准系列1 DB37 /T575—2005精确吸取标准工作液（4.7.2)1.00mlL、5.00mL，以及标准储备液（4.7.1)1.00mL、2.00mL、5.00mL,分别用甲醇（4.2）稀释至10mL。该标准系列中氯羟吡啶的相应浓度分别为：1.00μg/ml、5.00μg/mL、10.00μg/mL、20.00 μg/mL、50.00μg/mL。现用现配.5仪器设备5.1分析天平：感量0.1mg。5.2超声波清洗器。5.3振荡器。5.4高效液相色谱仪：具有C柱和紫外检测器针头过滤器：孔径为0.45μm有机系滤膜。6试样的制备实验室样品用四分法缩减，分取200g左右，粉碎全部过0.45mm孔径筛，充分混勾，装入磨口瓶中备用。7分析步骤7. 1提取称取适量试样（配合饲料5g，浓缩饲料、添加剂预混合饲料1g～2g）精确至0.1g，置于100ml具塞三角瓶中，准确加入甲醇（4.1）50mL，振摇使试料全部润湿，放在振荡器上振荡提取20min，静置数分钟，取适量上清液，并用甲醇稀释至10mL使获得的溶液中每毫升含氯羟吡啶1μg～50μg，过0.45μm有机系滤膜（5.6），滤液待测.7.2测定7.2.1高效液相色谱参考条件色谱柱：C柱柱长250mm，内径4.6mm，粒度5μm.柱温：室温。流动相：磷酸盐缓冲液十乙精=85十15流速： 1. OnL/min。检测器：紫外检测器检测波长：270nm。进样量：20μL.7. 2. 2定量测定按高效液相色谱仪器说明书调整仪器操作参数。向色谱柱中分别注入标准溶液（4.7.3）和试样溶液（7.1），积分得到峰面积，用标准曲线定量。8结果计算8.1计算公式鼠羟吡啶的含量（X），以毫克每干克表示，按公式(1)计算：m(1)....式中:试样色谱峰面积对应的氯羟此院的质量为微克，μg：试料质量为克，g：D-稀释倍数。2 DB37 /T575—20058. 2以两次平行测定结果的算术平均值为测定结果，计算结果保留三位有效数字。精密度9.1重复性同一实验室两次独立测定结果的相对偏差不大于10%。9. 2再现性不同的实验室间两次独立测定结果的相对偏差不大于20%。3