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az31b可降解镁合金的鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验 阅读本文 0 镁合金铸造合金的研究 镁和镁合金具有比金属生物材料具有更高的强度和柔软性，并且具有高度的生物分解潜力。作为一种新型材料，它显示出了国内外的广泛优势和潜力。 牙科铸造合金直接置入口腔内, 要求具有良好的生物相容性, 镁合金同样也不例外。由于合金在体液的作用下会发生腐蚀, 可引起机体细胞的细胞毒性、过敏、甚至癌变等 遗传毒性试验目前已有200多种试验方法, 但常规使用的仅约20种, 检测基因突变的试验方法中, Ames试验使用最广 1 肝匀浆的制备 设计:对比观察的体外实验。 时间及地点:实验于2007-06/07在国家沈阳新药安全评价研究中心实验室完成。 材料:成年雄性SD大鼠5只, 体质量180~220 g, 由上海西普尔-必凯实验动物有限公司提供。 鉴定试验菌株遗传性状, 分别进行对组氨酸的要求, 脂多糖屏障缺陷, 紫外线损伤修复缺陷, 抗氨苄青霉素试验, 抗四环素试验和自发回变6项试验。遗传性状鉴定合格后, 37℃振荡培养, 使增菌液浓度达到 (1~3) ×10 实验过程: 4种培养基制作:按标准细菌回复突变试验 (Ames) 要求。 活化系统:S-9及S-9mix均按Ames原法要求制作、使用和保存。 S-9:用多氯联苯1254 (Aroclor 1254) 诱导成年雄性SD大鼠, 5 d后处死, 处死前一天绝食, 饮水不限。在无菌条件下取出肝脏;以匀浆机无菌冰浴条件下制作肝匀浆, 全自动冷冻离心机 (4℃) 9 000 g离心15 min, 上清液即为S-9。经无菌及酶活性检查合格后, 于超低温冷藏箱-80℃保存、备用。 S-9mix:在S-9基础上, 用时现配, 多余弃去。需加辅助因子NADP及有关盐溶液。 剂量设计:将样品合金片清洗 (乙醇, 超声波) 灭菌后, 以生理盐水为浸提介质, 参照GB/T16886.12-2000所规定的浸提液制备方法, 以材料表面积 (双面) /浸提介质为6cm 操作方法:用标准Ames法, 全部采用平板掺入试验 (Plate-incorporation) , 分为: 非活化平板掺入试验:向溶化并保温在45℃的含上层培养基2 m L试管中依次加入供试药液0.1 m L、增菌液0.1 m L混匀。迅速倾入底层培养基上使其均匀分布, 4个剂量, 3次重复, 平行设阴性对照无菌生理盐水0.1 m L/皿, 菌株TA97、TA98和TA102阳性对照为敌克松 (Dexon) 50μg/皿, 菌株TA100阳性对照为叠氮钠 (Na N 活化平板掺入试验:向溶化并保温在45℃的含上层培养基2 m L试管中依次加入供试药液0.1 m L、增菌液0.1 m L和0.33 m L S-9mix混匀, 迅速倾入底层培养基上使其均匀分布, 4个剂量, 3次重复, 平行设阴性对照无菌生理盐水0.1 m L/皿, 阳性对照2-AF 20μg/皿, 待顶层培养基凝固后, 将平板翻转, 37℃培养48 h, 计数每皿回变菌落。 主要观察指标:计数每皿回变菌落数, 求取3次重复的平均数。凡高于阴性对照2倍以上者即为阳性结果。 设计、实施、评估者:设计为第一作者, 实施为全部作者, 评估为第一作者, 评估者经过正规培训。 统计学方法:由第一作者采用SPSS 10.0进行数据处理, 数据以ue0af±s表示。 2 结果 2.1 细菌回复突变试验 由表1可见, 各菌株对应各剂量组细菌回变数均小于阴性对照组细菌回变数的2倍;而阳性对照组引起测试菌株的回变菌落数明显增加, 并远超过阴性对照组的2倍以上。 2.2 阳性对照组细菌回复突变物检测 由表2可见, 各菌株对应各剂量组细菌回变数均小于阴性对照组细菌回变数的2倍;而阳性对照组引起测试菌株的回变菌落数明显增加, 其中TA97、TA98、TA100菌株中远超过阴性对照组的2倍以上, TA102菌株中未达阴性对照组细菌回变数的2倍, 这是因为此菌株目前还没有找到有效的阳性致突变物。 3 主要的研究建议 在试验中, 镁合金浸提液制作的方法上参照了GB/T16886.12-2000所规定的浸提液制备方法。试验采用Ames试验方法中的标准平板掺入法, 此法简单、快速, 试验结果与致癌性资料有较高符合率。试验结果为阴性, 说明材料无明显的致突变性。但由于存在菌株变异等原因, 导致假阴性结果的发现, Ames试验现在可作为突变剂的初步筛选, 是体外致突变性试验中的一项快速、有效的方法, 但尚需进行染色体畸变试验、DNA损伤试验等相关的试验, 才能对其致突变性作出较全面的预测。 对于镁及镁合金还存在以下问题有待进一步研究, 一是其在体内的降解机制还不明确, 如何控制其降解的速率还有待进一步研究, 二是生物相容性的其它相关研究