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艾烟中可吸入颗粒物致突变性试验 针灸法是中医学的重要组成部分。几千年来，它一直维持着人们的健康，取得了显著的临床效果，并在临床上得到了广泛应用。然而，针灸过程中产生的烟雾影响环境，导致气体中积聚的颗粒增多。文献中报道艾灸的临床疗效的颇多 材料表面 1. 美国合作浓度水质 便携式PM 2.5/PM10采样器, M i n i Vol, 美国AIRMETR ICS;剑桥滤片, 规格:F319-0 4, Whatman International Ltd;超净工作台, BBS-SSC-A, 中国济南鑫贝西生物技术有限公司;CO 2. 药物和试剂 方法和结果 1. 爱斯隆pm0的制备 2. 方使用方 Ames试验用菌株TA97、TA98、TA100和TA102, 经基因型和生物学性状鉴定合格方能使用。以下鉴定项目:组氨酸缺陷型、脂多糖屏障缺陷、R因子 (抗氨苄青霉素) 、四环素抗性、uvr B修复缺陷型、自发回变率6项, 鉴定合格后, 增菌培养用牛肉膏蛋白胨液体培养基, 接种后于37℃, 100r min振荡培养12h左右, 细菌生长相为对数期末, 含菌数应为1×10 3. 对照物的制备 试验分组:设0、62.5、125、250、500、1 000μg/皿6个梯度, 0μg/皿参见阴性对照组, 每组均做代谢活化 (+S9) 和非活化 (-S9) 的对照。TA97用敌克松 (50μg/皿) 和2-氨基芴 (10μg/皿+S9) 做阳性对照物, TA98用敌克松 (50μg/皿) 和2-氨基芴 (10μg/皿+S9) 做阳性对照物, TA100用叠氮钠 (1.5μg/皿) 和2-氨基芴 (10μg/皿+S9) 做阳性对照物, TA102用敌克松 (50μg/皿) 做阳性对照物。实验采用平板掺入法 (详见GB-15193.4-203) :封顶层胶时:在保温的顶层培养基中依次加入测试菌株新鲜菌液、受试物等混匀后, 再倒入3个底层培养基, 转动平皿使顶层均匀分布在底层上, 平放固化, 将平板翻转, 37℃培养48h, 计数每皿回复突变菌落。 4. 统计方法 所有结果应用SPSS进行统计学处理, 采用单因素方差分析, 结果以 5. 诱变试验阳性结果是否致其浓度差异 在背景生长良好条件下, 受试物组回变菌落数增加1倍以上 (即回变菌落数等于或大于2乘以未处理对照数) , 并有剂量反应关系或至少某一测试点有可重复的并有统计学意义的阳性反应, 即可认为该受试物诱变试验阳性。出报告时, 阳性结果至少应做3次测试, 阴性结果至少进行2次测试, 才能对受试物做出判定。 结果:TA97菌结果见表1;TA98菌结果见表2;TA100菌结果见表3;TA102结果见表4。表中数据显示MSC在代谢活化下TA98诱变阳性, TA98菌的回变菌落数增加1倍以上, 且差异有统计学意义, 并有剂量反应关系 (见图1) , TA97、TA100、TA102诱变阴性。非代谢活化下均为阴性, 此结果可以重复。根据GB-15193.4-203, 认为该受试物诱变实验阳性。 致突变药物的检测 本实验采用的是AMES实验常用菌株:鼠伤寒沙门氏菌TA97、TA98、TA100、TA102检测MSC的致突变性, 其中TA97、TA98可检测出各种移码突变的诱变剂, TA100可检测碱基对的置换, TA102可检测TA97、TA98、TA100无法检出的其它的移码突变和碱基对的置换。根据致突变物能灵敏而特异地使该突变株回变成原型, 并使用代谢活化剂 (本实验用的是大鼠肝微粒体酶) 将某些需体内生物转化的间接诱变剂转变为具有诱变性的物质产生诱变作用, 使菌株在无组氨酸的培养基中也能生长, 较未处理对照组增多, 出现诱变试验阳性。 本试验结果提示, 艾烟代谢活化后使沙门氏菌TA98平板掺入回复突变阳性, 对应的突变类型为移码突变, 诱变物所产生的DNA损伤在复制时转变为突变, 表现为功能基因产物, 进一步生长成菌落。但艾烟在体内的具体的吸收代谢过程应当结合微核实验和染色体畸变实验结果进行综合分析, 考虑体内和体外的差异以及剂量的累计等。文献中关于艾烟成分致突变性的研究结果多为阴性, Wheeler J等 该类试验的目的是为了研究受试物引起人体突变的可能性, 预测其对人的远期危害。如果一种受试物在多项遗传毒性试验中证明有致突变性, 一般也假定其对人也是致突变物, 可能具有遗传危害。综上所述, MSC具有潜在的致突变, 艾烟中含有可能致遗传毒性的物质, 考虑临床诊室的艾烟浓度远远低于浓度, 对艾烟建立一个安全评价体系非常必要, 今后将进行大量实验寻找一个安全浓度, 指导临床使用。 三年陈艾灸条, 18mm×200mm×10支, 南阳汉医有限责任公司;二甲基亚砜, 分析纯, 美国Sigma-Aldri