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超声波提取柚皮中的果胶 果胶是一种天然的高分子聚合物。它是在植物材料中制备的多聚体。它是食品纤维的主要成分。 1 材料和方法 1.1 实验仪器和设备 柚皮从市场购得;去离子水自制;醋酸-醋酸钠缓冲溶液、果胶酸酶 (2×10 数控超声波发生器 杭州成功超声设备有限公司;101A数显鼓风干燥箱 吴江峻宇机械设备有限公司;JJ-2-高速组织捣碎机 金坛市鑫鑫实验仪器有限公司;pHS-828精密型酸度计 北京华瑞博远科技发展有限公司;HH-2电热恒温水浴锅 上海比朗仪器有限公司;TDZ5-WS低速离心机 长沙维尔康湘鹰离心机有限公司;660傅立叶变换红外光谱仪 安捷伦科技有限公司。 1.2 果胶酸酶提取 取粒度为50目的柚皮粉末50g, 加入一定量的醋酸-醋酸钠缓冲溶液, 置于数控超声波发生器中, 在一定功率的超声波作用下处理一定时间。 待混合液冷却至室温后加入一定量的果胶酸酶, 置于恒温水浴锅中, 在一定的温度和一定时间下提取1~4次, 将所得到的提取液经过5000r/min离心10min。用蒸馏水清洗残渣, 离心, 合并上清液。 上清液85℃水浴灭酶5min, 冷却, 用95%的乙醇清洗, 5000r/min离心6min, 分离沉淀出的果胶, 再用95%乙醇清洗两次, 每次6min, 以除去色素和游离的中性糖, 将果胶置于50℃的真空干燥箱中干燥2.5h, 计算出得率。采用常规水浴加热提取法在相同的工艺条件下进行对比实验。 1.3 单次提取时间和参数 在探索性实验的基础上, 用酶提取3次, 以超声波功率 (A) 、超声频率 (B) 、超声波处理时间 (C) 、单次提取时间 (D) 、缓冲液pH (E) 、酶提取温度 (F) 、酶液用量 (G) 为研究对象, 采用L 1.4 测试指标 按照GB 25533-2010 用Varian 660傅立叶变换红外光谱仪对果胶进行红外光谱分析, 扫描范围4000~500cm 2 单次提取条件的影响果胶得率 通过一系列的探索性实验发现, 超声波处理时间与功率、超声波频率和缓冲液p H、酶法提取温度和酶液用量、单次提取时间和提取次数等因素对果胶的得率有较大的影响。下面就根据探索性实验的基本数据对单工艺因素进行探讨。 2.1 单因素实验 2.1.1 提取功率的确定 图1是超声波功率分别为120、160、200、240W时不同反应时间下果胶提取量的变化关系图。由图1可知, 超声波功率对果胶提取量的影响很大, 功率低时, 果胶提取量较低;随着功率的升高, 果胶提取量不断升高, 但20min后, 功率为200W的提取量与240W的相接近, 考虑到生产成本, 将功率确定为200W。同时, 从图1中还发现:当功率为200W时, 16min后, 果胶提取量增幅趋缓, 随着时间的延长, 提取量曲线几乎接近水平, 这是因为超声波能促使植物细胞组织破壁或变形, 使胞内物质释放出来, 在提取初期, 时间越长, 胞内物质释放物越多, 果胶的提取量也就越高, 随着时间的延长, 胞内释放物的含量逐步减少, 果胶提取量增加不明显。故将正交实验中超声波处理时间确定为16min。 2.1.2 超声波提取频率的选择 图2是超声波频率分别为20、24、28、32kHz时, 不同缓冲液pH与果胶提取量的变化关系图。由图2可知, 频率为20kHz时提取量最大, 32kHz的最小, 24和28kHz的居于中间。这是因为:频率低的振幅大, 固体物料与流体混合越均匀, 提取量越大;但频率也不是越低越好, 因为频率低, 能耗高, 对设备的要求也高, 而20kHz的果胶提取量略高于24kHz的果胶提取量, 但考虑到生产成本及对设备的要求, 选择24kHz为超声波频率。同时, 图2中也显示, 在处理频率为24kHz、缓冲液pH为5左右时的果胶提取量较高, 超过5后减少, 这可能是因为pH为5左右时酶的活性较好的缘故, 因此选定正交实验中缓冲液的pH为5。 2.1.3 酶法提取温度和酶溶液的用量对提取量的影响 升高温度能够提高反应体系的活化能进而提高反应速度, 但太高的温度又会使酶液失活 2.1.4 不同提取次数对果胶总提取量的影响 图4中显示了不同提取次数和不同单次提取时间对果胶提取量的影响:随着提取次数的增加, 果胶总提取量不断增加, 4次提取果胶总提取量略高于3次提取果胶总提取量, 从生产成本角度考虑提取次数以3次为宜。由图4还可知, 在提取次数为3次时, 随着提取时间的延长, 果胶总提取量逐渐增加, 当提取时间超过50min后再延长时间, 果胶提取量减小。这是因为随着提取时间的延长, 果胶分子链会在酶的作用下发生降解, 最终影响果胶的提取量 2.2 正交实验分析 正交实验见表2, 由表2可知, 影响果胶提取量的因素顺序为ABFCDEG, 工艺的