新型降血糖化合物g004的遗传毒性与生殖毒性研究.docxVIP

新型降血糖化合物g004的遗传毒性与生殖毒性研究 g004化学被称为g{4-[2-4-溴苯基磺酸乙酰基）苯磺酰胺}-3-（反四-甲基环己基）。它是一种新型的抗高血压药物，以格列梅为主体，引入抗高血压药物活性基团以合成抗高血压药物。 1 材料表面 1.1 仪器 BB16UV型CO 1.2 药物、试剂和仪器 G004原料药 (中国药科大学新药研究中心提供, 批号01, 纯度:99.0%;使用前以0.5%羧甲基纤维素钠溶液配制成混悬液) ;哺乳动物肝脏微粒体酶 (简称“S9”, 上海西唐生物科技有限公司) ;4-硝基邻苯二胺 (NPD) 、2-氨基芴 (2-AF) 、2-氨基蒽 (2-AA) (美国Sigma-Aldrich公司) ;柔红霉素 (美国Pharmacia公司) ;叠氮钠 (东阳市凯明特种试剂有限公司) ;甲基磺酸甲酯 (MMS, 比利时Acros Organics公司) ;1, 8-二羟基蒽醌 (中国医药集团上海化学试剂公司) ;丝裂霉素 (浙江海正药业股份有限公司) ;环磷酰胺 (江苏恒瑞医药股份有限公司) ;RPMI Medium 1640培养液 (日本日水制药株式会社) ;其余试剂均为分析纯, 水为自制纯化水。 1.3 克氏原鼠体质量 SPF级ICR雄性小鼠50只, 体质量22~24 g;SPF级SD大鼠225只, 雌鼠体质量为210~269 g, 雄鼠体质量在300 g以上。动物均购自上海斯莱克实验动物有限责任公司, 动物生产许可证号:SCXK (沪) 2007-0005。动物均在温度为20~26℃、相对湿度为40%~70%的屏障环境中进行饲养。 1.4 chl细胞细胞 鼠伤寒沙门氏菌组氨酸营养缺陷型突变株 (TA97、TA98、TA100、TA102、TA1535) 、中国仓鼠肺成纤维细胞 (CHL细胞) 均来自江苏省食品药品检验所。 2 方法 2.1 ases测试 Ames试验 (鼠伤寒沙门氏菌突变株回复突变试验) 采用平板掺入法 2.2 chl细胞染色体畸形试验 根据预试验结果[G004对细胞的半数抑制浓度 (IC 2.3 大鼠骨骼微沙测试 取雄性ICR小鼠50只, 随机分为5组, 每组10只。根据预实验结果[小鼠灌胃给予G004的半数致死量 (LD 2.4 精子交配成功的大鼠精子的筛选 参照文献[9-10]方法, 将大鼠按雌性/雄性2∶1的比例合笼, 每天早上对雌鼠进行阴道涂片检查, 显微镜下查见精子视为交配成功, 并将当天定为妊娠第0天。取交配成功的雌性大鼠100只按体质量分层随机分为5组, 每组20只。根据预实验结果 (G004单次灌胃5 000mg/kg后未引起大鼠死亡) , 并按照《药物生殖毒性研究技术指导原则》 2.5 各组间方差齐性检验 采用SPSS 19.0软件对数据进行统计分析。计量资料以ue0af±s表示, 先进行各组间方差齐性检验, 若方差齐则进行单因素方差分析, 如有统计学差异则进行Tukey检验;若方差不齐则进行非参数检验 (Kruskal-Wallis检验) , 如有统计学差异则各剂量组与对照组间比较采用Mann-Whitney U检验。计数资料采用χ 3 结果 3.1 景菌苔藓测定 与溶媒对照组比较, 阳性对照组回复突变菌落数显著增加, 差异有统计学意义 (P0.05) 。G004各剂量组平板背景菌苔均正常;与溶媒对照组比较, 在±S9条件下, G004各剂量组的TA97、TA98、TA100、TA102、TA1535菌株的回复突变菌落数均未显著增加, 差异均无统计学意义 (P0.05) 。G004的Ames试验结果为阴性, 即G004对鼠伤寒沙门氏菌突变株回复突变试验无明显影响。G004对鼠伤寒沙门氏菌突变株回复突变菌落数的影响见表1。 3.2 p0.05 与溶媒对照组比较, 阳性对照组CHL细胞染色体畸变率显著升高, 差异有统计学意义 (P0.05) ;在±S9条件下, G004各剂量组CHL细胞在药物作用不同时间后, 其染色体畸变率均未显著升高, 差异均无统计学意义 (P0.05) 。G004的CHL细胞染色体畸变试验结果为阴性, 即G004对CHL细胞染色体畸变试验无明显影响。 3.3 小鼠骨髓pce微核试验结果 给药期间及给药结束后, G004各剂量组、溶媒对照组和阳性对照组小鼠的外观和行为活动均未出现异常。骨髓涂片结果显示, 与溶媒对照组比较, 阳性对照组小鼠骨髓PCE微核率显著升高, PCE占总红细胞的比例显著降低, 差异均有统计学意义 (P0.05或P0.01) ;G004各剂量组小鼠骨髓PCE微核率、PCE占总红细胞的比例差异均无统计学意义 (P0.05) 。G004的小鼠骨髓微核试验结果为阴性, 即G004对小鼠骨髓微核试验无明显影响