DB34T 2241-2014畜禽饲料中伏马菌素 B1 的测定 —酶联免疫吸附法.docxVIP

ICS 65.120 B 46 安 徽 省 地 DB34 方 标 准 DB 34/T 2241—2014 畜禽饲料中伏马菌素 B1 的测定 —酶联免疫吸附法 Determination of fumonisin B1 in animal foodstuff—Enzyme linked immunosorbent assay 文稿版次选择 2014 - 12 - 17 发布 2015 - 01 - 17 实施 安徽 省 质 量 技 术 监 督 局 发 布 I DB34/T 2241—2014 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。 本标准有安徽农业大学提出。 本标准起草单位：安徽农业大学、和县畜牧兽医局、马鞍山市农业委员会。 本标准起草人： 王希春、伋兆法、吴金节、夏效平、陈祥国、李复辉、樊海新、李玉、冯士彬、李 贺侠、张宁。 1 DB34/T 2241—2014 畜禽饲料中伏马菌素 B1 的测定-酶联免疫吸附法 1 范围 本标准规定了畜禽饲料中伏马菌素B1 的酶联免疫吸附法测定的术语和定义、原理、设备、试剂、检 测步骤。 本方法适用于饲料原料或配合饲料中伏马菌素B1 的测定。 本方法的最低检测限为 10 μg/kg。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 14699.1 饲料 采样 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 伏马菌素 B1 fumonisin B1 ，FB1 伏马菌素B1 是主要由串珠镰刀菌代谢产生的一种真菌毒素。 4 原理 待检样品中的抗原和一定量的酶标抗原竞争与固相抗体结合， 如待检样品中无抗原， 则酶标抗原能 顺利的与固相抗体结合。如待检样品中含有抗原， 则与酶标抗原以同样的机会与固相抗体结合。待检样 品中抗原含量愈多， 结合在固相抗体上的酶标抗原愈少， 则其最后加入酶底物后显色也愈浅。颜色的深 浅与待检样品中抗原含量成反线性相关。 5 设备 5.1 粉碎机(DYF-500) 5.2 分析天平(精确到 0.001 g) 5.3 涡旋混匀器(SZ-1) 5.4 酶标仪(MK3，波长 450 nm) 5.5 酶标板(48 孔或 96 孔) 5.6 单道微量移液器(10 μL、100 μL、1000 μL) 2 DB34/T 2241—2014 5.7 多道微量移液器(300 μL) 6 试剂 6.1 本检测方法所用试剂，凡未指明规格者，均为分析纯，水为 GB/T 6682 规定的一级水。 6.2 乙腈-水：1:1(V:V) 6.3 包被抗原 FB1 6.4 FB1 单克隆抗体 6.5 HRP-羊抗小鼠 IgG 6.6 包被缓冲液：碳酸钠(Na2CO3 ) 1.59 g，碳酸氢钠(NaHCO3 )2.93 g，加水溶解，调 pH 至 9.6，定 容至 1000 mL。 6.7 洗涤液 PBST：磷酸二氢钾(KH2PO4 )0.2 g， 磷酸氢二钠(Na2HPO4 .12H2O)2.9 g，氯化钠(NaCl) 8 g，氯化钾(KCl)0.2 g，吐温-20 0.5 mL， 加水溶解，调 pH 至 7.4，定容至 1000 mL。 6.8 封闭液：5％脱脂奶粉，称取 5 g 脱脂奶粉，加入洗涤液至 100 mL，保存于 4℃冰箱中。 6.9 FB1 标准贮备溶液：称取 1 mg FB1 标准品， 用乙腈水配制成约 1 mg/mL FB1 贮备液。贮备液置于 4℃冰箱中避光保存。 6.10 FB1 标准溶液：精确吸取标定后的标准储备液， 用乙腈水新鲜配制成 FB1 标准溶液， 浓度分别为 2.5 ng/mL、5 ng/mL、10 ng/mL、50 ng/mL、100 ng/mL、250 ng/mL。 6.11 TMB 底物显色液 ——A 液：醋酸钠(C2H3O2Na)13.6 g，柠檬酸(C6H8O7.H2O)1.6 g， 30％双氧水(H2O2 )0.3 mL，加 水至 500 mL。 ——B 液：乙二胺四乙酸二钠(EDTA) 0.2 g，柠檬酸(C6H8O7.H2O)0.95 g，甘油(C3H8O3 )50 mL， TMB 0.15 g，加水至 500 mL。 使用前，A 液和 B 液按 1:1 混合使用。 6.12 终止液：2 mol/L H2SO4 溶液。 7 检测步骤 7.1 样品 饲料原料或配合饲料。 7.2 试样制备 按 GB/T 14699.1 饲料采样方法取得试