SC 3024-2004腹泻性贝类毒素的测定 生物法.pdf

ICS. 67.050B 50SC中华人民共和国水产行业标准SC/T 3024—2004生物法腹泻性贝类毒素的测定Determination of diarrhoea shellfish poison Bioassay2004-01-07 发布2004-03-01实施中华人民共和国农业部发布 中华人民共和国水产行业标准腹泻性贝类毒素的测定生物法SC/T**中国农业出版社出版(北京市朝阳区麦子店街18号楼）网址：)（邮政编码：100026中国农业出版社印刷厂印刷新华书店北京发行所发行各地新华书店经销***印张0.5字数5千字开本 880mm×1230mm 1/162004年2月北京第1次印刷2004年2月第1版印数：1～1000 册书号：16109·306版权专有侵权必究举报电话：（010SC/T 3024—2004前言本标准参考了日本厚生省推荐使用的腹泻性贝类毒素的测定方法。本标准的附录 A为资料性附录。本标准由中华人民共和国农业部提出。本标准起草单位：国家水产品质量监督检验中心、中国水产科学研究院东海水产研究所。本标准主要起草人：王联珠、袁骐、李晓川、冷凯良、陈亚瞿、蒋玫。一 SC/T 3024—2004腹泻性贝类毒素的测定生物法1范围本标准规定了腹泻性贝类毒素（DSP）的测定方法一一-生物法。本标准适用于软体动物贝类可食部分中腹泻性贝类毒素（DSP）的测定。2 原理用丙酮提取贝类中毒素，再转移至乙醚中，经减压浓缩蒸干后，再以1%吐温-60生理盐水溶解残留物，注射小鼠，观察存活情况，计算其毒力。3试剂和材料3.1丙酮（分析纯)。3.2乙醚（分析纯)。3.31%吐温-60生理盐水：称取1.0 g吐温-60，溶于生理盐水（0.8%NaCI）中，并定容至100.0mL.4仪器和设备4.1旋转蒸发器。4.2均质器。4.3磨口烧瓶：圆底，500 mL、100mL。4.4布氏漏斗：$100 mmo4.5分液漏斗：具塞，500mL。4.6天平：感量0.1g。4.7刻度试管：10 mL，具塞。4.8 冰箱：0℃～5℃和-15℃～-20℃。4.9 注射器：1 mL。4.10注射器针头：8#。4.11小鼠：体重为 16 g～20 g的健康 ICR系雄性小鼠。5检样的制备5.1生鲜带壳的贝类a）用清水彻底洗净贝类外壳，开壳，用清水淋洗内部去除泥沙及其他外来杂质，仔细取出贝肉，切勿割破肉体;b）收集贝肉，沥水5min，捡出碎壳等杂物，迅速冷冻，贮藏备用；c）注意不要破坏闭壳肌以外的组织，尤其是中肠腺（又称消化盲囊，组织呈暗绿色或褐绿色）。开壳前不能加热或用麻醉剂。5.2冷冻贝类在室温下，使冷冻的样品（带壳或去壳的）呈半冷冻状态，按5.1方法清洗、开壳、淋洗、1 SC/T 3024—2004取肉。5.3取样a）可以切取中肠腺的贝类（扇贝、贻贝、牡蛎等），称取200g贝肉后，仔细切取全部中肠腺，将中肠腺称重后细切混合作为检样，注意不要使中肠内容物污染案板；b）对于尚未确定部位毒性的贝类及不易切取中肠腺的小型贝肉，可将全部贝肉细切、混合，作为检样；c）为避免毒素的危害，应戴手套进行检验操作，移液管等用过的器材应在5%的次氯酸钠溶液中浸泡1h以上，以使毒素分解；废弃的提取液等也应用5%的次氯酸钠溶液处理。6提取6.1取5.3a）处理的中肠腺，或5.3b）处理的200g贝肉置于均质杯内，均质2min。6.2加3倍量丙酮，与样品充分搅拌均匀后，用布氏漏斗抽滤并收集提取液。对残渣以检样两倍量丙酮再次抽滤两次，合并抽滤液。6.3将抽提液移人500mL的磨口烧瓶中，减压浓缩（旋转蒸发器，56℃）去除丙酮，直至在液体表面分离出油状物。6.4将浓缩液移人分液漏斗内，以100 mL～200mL乙醚和少量的水洗下粘壁部分，轻轻振荡（不能生成乳浊液），静置分层后，去除水层（下层），用相当乙醚半量的蒸馏水洗乙醚层两次，再将乙醚层移人250mL的磨口烧瓶中，减压浓缩（旋转蒸发器，35℃）去除乙醚。6.5以少量乙醚将浓缩物移人100 mL磨口烧瓶中，再次减压浓缩去除乙醚。6.6以1%吐温-60 生理盐水将全部浓缩物在刻度试管中稀释到10 mL。此时 1 mL试液相当于 20 g去壳贝肉的重量，以此悬浮液作为试验原液。6.7以试验原液注射小鼠，24 h内3只均死亡时，需将试验原液进一步稀释，再注射小鼠。稀释前，应先振荡使溶液成均匀悬浮液，再取部分试液以1%吐温-60生理盐水稀释。7小鼠试验7.1以振荡器使试液或其稀释液成为均匀的悬浮液。7.2将每只小鼠称重，每三只小鼠为一组，分别将 1 mL试液注射到小鼠腹腔中。7.3同时，另取三只小鼠作为对照组，注射1mL 1%吐温-60 生理盐水于腹腔中。7.4观察自注射开始到24 h后的小鼠存活情况，求出