DB34T 3191-2018饲料中延胡索酸泰妙菌素含量测定 高效液相色谱法.docxVIP

ICS 65.120 B 46 安 徽 省 地 DB34 方 标 准 DB 34/T 3191—2018 饲料中延胡索酸泰妙菌素含量测定 高效液相色谱法 Determination of Tiamulin Fumarate in feed High performance liquid chromatography method 文稿版次选择 2018 - 08 - 08 发布 2018 - 09 - 08 实施 安徽省质量技术监督局 发 布 I DB34/T 3191—2018 前 言 本标准按照 GB/T 1.1—2009 给出的规则起草。 本标准由安徽省兽药饲料监察所提出。 本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。 本标准起草单位： 安徽省兽药饲料监察所、 宁国市金鼎家庭农场、 宁国市金东坊农业开展有限公司、 合肥市动物卫生监督所、阜阳市动物卫生监督所、安徽省农业科学院畜牧兽医研究所、安徽省水产技术 推广总站。 本标准起草人： 吴昊、刘发全、李东风、宋亚伟、吴兵、方芳、郭恒心、徐月清、龙中原、胡群芳、 张利亚、郑新勇、钱昌银、程扬、郑举、潘孝成、孙德祥、何为俊、王群、汪百才、石翠芳。 1 DB34/T 3191—2018 饲料中延胡索酸泰妙菌素含量测定 高效液相色谱法 1 范围 本标准规定了饲料中延胡索酸泰妙菌素含量测定的高效液相色谱法。 本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和预混合饲料中延胡索酸泰妙菌素含量测定。 本标准定量限为 1.0 mg/kg。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件， 仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 14699.1 饲料 采样 3 原理 试样中的延胡索酸泰妙菌素经甲醇溶液超声提取， 过滤后经色谱柱分离， 用高效液相紫外检测器检 测，外标法定量。 4 试剂和材料 除特殊说明外，本方法所用试剂均为分析纯，用水符合 GB/T 6682 中一级用水的规定。 4.1 甲醇：色谱纯。 4.2 乙腈：色谱纯。 4.3 碳酸铵。 4.4 高氯酸。 4.5 高氯酸水溶液：取高氯酸 8.5 mL， 加水至 100 mL。 4.6 碳酸铵缓冲液溶液：取碳酸铵 10 g，加水 800 mL 使溶解， 加高氯酸水溶液(4.6) 24 mL，加水 至 1000 mL。 4.7 流动相：碳酸铵缓冲液溶液+甲醇+乙腈，按体积比 49∶28∶23(V/V/V)。 4.8 延胡索酸泰妙菌素标准品：纯度≥98.0％。 4.9 延胡索酸泰妙菌素标准溶液的制备 4.9.1 延胡索酸泰妙菌素标准溶液贮备液： 精确称取 20 mg 延胡索酸泰妙菌素标准品(精确至 0.01 mg) 于 200 mL 容量瓶中，用流动相(4.8)超声溶解，冷却，此溶液浓度为 100 μg/mL。置于 4℃冰箱中保 存，有效期 60 天。 4.9.2 延胡索酸泰妙菌素标准工作溶液： 分别吸取贮备液(4.10.1) 1 mL、2 mL、5 mL、10 mL、20 mL 于 100 mL 容量瓶中，用流动相溶液(4.8)定容，标准工作溶液系列浓度分别为 1 μg/mL、2 μg/mL、5 μg/mL、10 μg/mL、20 μg/mL。 2 DB34/T 3191—2018 5 仪器和设备 5.1 高效液相色谱仪(配紫外检测器)。 5.2 分析天平：感量 0.1 mg、0.01 mg。 5.3 离心机： ≥3000 r/min。 5.4 超声波仪。 5.5 分析筛：孔径 0.42 mm。 5.6 粉碎机。 5.7 微孔滤膜：孔径 0.45 μm 尼龙滤膜。 6 试样的制备 按 GB/T 14699.1 的规定采样，选取饲料样品 500g 以上，四分法缩减至 100g， 磨碎，全部通 过分析筛(5.5)，充分混匀，装入磨口瓶中备用。 7 分析步骤 7.1 提取 7.1.1 称取试样适量(配合饲料 5.0 g、浓缩饲料 3.0 g、预混合饲料 1.0 g)， 精确至 0.001g，置于 50 mL 容量瓶中，用甲醇溶液(4.2) 准确定容，置于超声波仪(5.4)超声提取 30 min。 7.1.2 将试样提取液(7.1.1) 转移至离心管，3000 r/min，离心 10 min，取离心上清液用 0.45 μm 尼龙滤膜过滤，滤液作为试样溶液上机测定。 7.2 测定 7.2.1 高效液相色谱条件 ——色谱柱：C18 型柱，长 250 mm，内径 4.6 mm，粒径 5 μm，或相当性能 C18 柱； ——检测波