高效液相色谱法测定一点红中克氏千里光碱的含量.docxVIP

高效液相色谱法测定一点红中克氏千里光碱的含量 又名红景天、羊蹄草、红叶草、红叶草、红叶果、青石等。这是科举植物的红色一点红（l.）d的干燥草地。一点红是我国南方地区习用的传统中草药, 具有清热解毒、散瘀消肿的功效, 是妇科用中成药花红片、花红胶囊的主要原料药, 临床上常用于上呼吸道感染、口腔溃疡、肺炎、泌尿道感染、乳腺炎、肠炎、外伤感染、急性结膜炎、急性扁桃体炎, 胆囊炎、疮疔痈肿、湿疹、跌打损伤等 1 点红药材 Agilent 1260高效液相色谱仪, KQ5200超声仪, Satorius分析天平。 一点红药材 ( 市售) 经广州中医药大学临床药理研究所祝晨蔯研究员鉴定为菊科植物一点红Emilia sonchifolia ( L. ) DC的干燥全草; 克氏千里光碱对照品为实验室自制, 经色谱法检测其纯度达到98% 以上; 乙腈为色谱纯, 水为超纯水, 其余试剂均为分析纯。 1.2 在铬条件下和系统适用性试验中 色谱柱为Kromasil RP-C 1.3 对照溶液的制备 取干燥至恒重的克氏千里光碱对照品约10mg, 精密称定, 加甲醇并制成每1 m L含10 mg的溶液, 即得。 1.4 标准曲线的绘制 分别精密吸取对照品溶液0. 1, 0. 2, 0. 3, 0. 5, 0. 8, 1. 0, 2 m L, 置10 m L量瓶中, 加80% 甲醇至刻度, 摇匀, 分别吸取10μL, 注入液相色谱仪, 记录色谱图。以克氏千里光碱面积为纵坐标 ( Y) 、浓度为横坐标 ( X) 绘制标准曲线, 得回归方程Y = 58. 767X- 217. 55 ( r = 0. 9998 ) 。结果表明克氏千里光碱在10. 04 ~ 200. 8μg·m L 1.5 正交试验设计 以克氏千里光碱含量为指标, 在单因素预试验的基础上, 选取甲醇浓度、溶剂用量、提取时间3个因素, 每个因素设3个水平, 选用L 由正交试验结果的直观分析可知, 各因素对克氏千里光碱提取量的影响程度大小依次为B A C, 较优水平组合为A 1.6 超声处理法 取供试品粗粉 ( 过四号筛) 1. 0 g, 精密称定, 置50 m L锥形瓶中, 精密加入80% 甲醇30 m L, 称定重量, 超声处理 ( 200 W, 40 k Hz) 40 min, 放冷, 称重, 用80% 甲醇补足减失重量, 摇匀, 滤过, 滤液浓缩至干, 再用80% 甲醇溶解定容至5 m L量瓶中, 摇匀, , 用微孔滤膜 ( 0. 45μm) 滤过, 取续滤液, 即得。 2 结果与分析 2.1 重复性与稳定性试验 2. 1. 1精密度试验取“1. 4”项下同一浓度的克氏千里光碱对照品溶液, 依法连续测定6次, 结果显示峰面积的RSD为1. 71% , 表明仪器进样精密度良好。 2. 1. 2重复性试验取同一批供试品粗粉1. 0 g, 共6份, 精密称定, 照“1. 6”项下方法制备供试品溶液, 依法测定克氏千里光碱含量, 结果显示其RSD为1. 97% , 说明方法重复性较好。 2. 1. 3稳定性试验取同一供试品溶液于0, 2, 4, 8, 12, 24 h进行测定, 结果显示峰面积的RSD为1. 31% , 说明供试品溶液在24 h内基本稳定。 2. 1. 4加样回收率试验取已知含量的同一批供试品粗粉 ( 过四号筛) 0. 5 g, 共6份, 精密称定, 按低、中、高3个浓度分别精密加入克氏千里光碱对照品溶液 ( 1. 004 mg·m L 2.2 样品测定 按建立的方法, 对不同产地13批市售样品进行含量测定, 结果见表4。 3 讨论 3.1 测定成分的结构试验 克氏千里光碱对照品为本实验室自制, 经 3.2 超声提取法 试验考察了回流法、超声提取法两种方法对克氏千里光碱含量测定的影响, 结果表明, 超声法提取率较高, 故选用超声提取法; 提取溶剂考察了三氯甲烷、甲醇和水三种不同提取溶媒, 结果以甲醇提取更完全; 考察了在溶媒中分别加入氨水和盐酸, 结果显示提取率没有明显差异, 故溶媒中无需加入氨水或盐酸。利用正交试验确定供试品最佳提取工艺为加30倍80% 甲醇超声提取40 min。 3.3 检测波长的确定 取“1. 3”项下的对照品溶液, 用DAD检测器对克氏千里光碱进行全波长扫描, 结果显示克氏千里光碱在220 nm处有最大吸收, 故选择220 nm作为检测波长。 3.4 洗脱系统溶剂 试验考察了甲醇-水、乙腈-水、乙腈-0. 2% 磷酸0. 2% 三乙胺溶液、乙腈-0. 1% 磷酸-0. 4% 三乙胺溶液4个溶剂洗脱系统。结果表明, 以乙腈-0. 1% 磷酸-0. 4% 三乙胺溶液 ( p H = 2. 0) 为流动相, 色谱峰峰形尖锐对称, 分离度高, 且基线稳定, 故选用