SN_T 4104-2015猪支原体肺炎检疫技术规范.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 4104—2015猪支原体肺炎检疫技术规范Quarantine protocol for Mycoplasma hyopneumoniae2015-02-09发布2015-09-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局刮涂层查真代 SN/T 4104—2015前言本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准负责起草单位：中华人民共和国重庆出人境检验检疫局、中华人民共和国上海出人境检验检疫局、重庆动物疫病预防控制中心、西南大学、重庆正大有限公司。本标准主要起草人：聂福平、杨俊、张强、李应国、曾政、王昱、肖进文、程光胜、王豪举、夏明星。I SN/T 4104—2015猪支原体肺炎检疫技术规范1范围本标准规定了猪支原体肺炎的病理学诊断方法、病原分离和鉴定方法、间接血凝试验、酶联免疫吸附试验、聚合酶链式反应试验。本标准适用于猪支原体肺炎的检疫、诊断、流行病学调查。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB4789.28食品安全国家标准食品微生物学检验培养基和试剂的质量要求GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB19489实验室生物安全通用要求WS233一2002微生物和生物医学实验室生物安全通用准则3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1猪支原体肺炎（Mycoplasmahyopneumoniae）猪支原体肺炎又称猪气喘病，猪地方流行性肺炎，是由猪肺炎支原体引起的一种接触性呼吸系统传染病，是造成养猪业经济损失最重要的疾病之一。该病以咳嗽和气喘为主要临床特征，病变部位主要在肺部，可见心叶、中间叶和尖叶有融合性支气管肺炎变化。该病广泛流行于世界各地，欧洲、亚洲、美洲以及大洋洲等主要养猪国家和地区均有发生。4实验室生物安全要求4.1检测工作中的个人防护参照GB19489。4.2实验室应遵循GB19489和WS233—2002对生物安全2级（BSL-2)实验室的生物安全要求。4.3使用过的实验用品应遵照GB19489对废弃物的处理要求进行无害化处理。5临床和病理学诊断5.1临床症状猪支原体肺炎是一种发病率高死亡率低的慢性呼吸道传染病，主要临床症状为慢性干咳。新发病猪群常呈急性，张口喘气，痉挛性阵咳，体温升高不明显。咳嗽持续几周甚至数月，育肥猪咳嗽最严重。部分患猪呈腹式呼吸，喘息沟明显。患猪食欲减退，消瘦，被毛粗糙，生长停滞。该病病程主要分急性、1 SN/T 4104—2015慢性两种类型。5.2病理学特征主要病变见于肺、肺门淋巴结和纵隔淋巴结。急性死亡患猪肺有不同程度的水肿和气肿。肉眼病变类似于膨胀不全的肺，尤其在疾病的慢性阶段。特征性病变是两肺的心叶、尖叶和膈叶前缘发生对称性的实变，肺门淋巴结肿大，肺中间叶实变，以及肺门淋巴结肿大、增生。病变最初为栗粒大至豆大呈均匀散布，逐渐扩展而融合成支气管肺炎。病变部界限明显，灰白色，无弹性，呈“胰样”“鱼肉样”。切开时，内有大量泡沫。其他器官无明显变化。5.3病理组织学检查典型病变组织通过常规的病理学检查，支气管和细支气管上皮组织纤毛数量减少，小支气管周围的肺泡扩大，泡腔充满多量炎性渗出物，肺泡间组织有淋巴样细胞增生。急性病例中，扩张的泡腔内充满浆液性渗出物，杂有单核细胞、中性粒细胞、少量淋巴细胞和脱落的肺泡上皮细胞。慢性病例中，其肺泡腔内的炎性渗出物中主要是淋巴细胞浸润。5.4X线检查X线检查对本病的诊断有重要价值，对可疑患猪进行X线透视，可做出诊断。在X线检查时，猪只以直立背胸位为主，侧位或斜位为辅。病猪在肺野的内侧区以及心膈角区呈现絮状及片状阴影。6病理分离和鉴定6.1材料准备6.1.1A26肉汤：制备方法见附录A。6.1.2固体培养基：制备方法见附录A。6.1.3厌气肉肝汤：制备方法见附录A。6.1.4血琼脂平板：按GB4789.28的方法配制。6.1.5Hanks液：配制方法见附录A。5%鸡红细胞液：制备方法见附录A。6.1.7灭菌干棉拭子。6.2病料采集6.2.1活体病料采集：用棉拭子深擦拭病猪的喉头或鼻腔，采集呼吸道分泌物。6.2.2 死后病料采集：无菌采取病键交界处肺组织。6.3病原分离将病肺组织剪成小于2mm²的碎块，浸人Hanks液中洗涤，除去血液和组织碎块，取3块～5块浸泡在盛有5mLA26肉汤的试管中；棉拭子浸人10mLA26肉汤中清洗，并压出棉花中残液，再经0.45μm的滤膜过滤除菌，将滤液分装于试管中。将上述试管置于含5%～10%CO2环境或用胶塞塞紧管口，在37℃下进行培养。1代～3代分离时，须每经3d～5d，以