SN_T 3524-2013化学品 鱼类生殖毒性试验方法.pdf

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 3524-2013化学品鱼类生殖毒性试验方法Chemicals-Fish assay for the reproduction toxicology2013-03-01发布2013-09-16实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 SN/T3524—2013目次前言IⅡ引言TV1范围2术语和定义3方法局限性说明4测试原理5测试可接受性标准6方法描述-+6. 1仪器6.2水**6.3测试溶液6.4鱼的饲养6. 5预暴露和鱼的选择7测试设计7.1一般说明7.2测试浓度的选择8试验过程8.1受试鱼的选择与称量8.2暴露条件...8.2.1时间8.2.2饲养.8.2.3灯光和温度8.3分析检测和测量的频率.8. 4观察8.4.1一般说明8.4.2存活率8.4.3行为和表观8.4.4繁殖力-.8.4.5鱼的人道处死8.4.6第二性特征的观察8.4.7卵黄蛋白原（VTG）.-8.4.8性腺组织病理学评价9数据和报告9.1采用方差分析(ANOVA)对生物标志物响应进行评价9.2测试结果报告10对于测试结果的解释和接受 SN/T3524—201310附录A（资料性附录）卵黄蛋白原分析的样品收集的推荐程序19附录B（资料性附录）检测特定内分泌活性物质对黑头呆鱼和青的第二性特征的评估..24附录C（资料性附录）鱼类内分泌筛选测试实验条件26附录D（资料性附录）斑马鱼和黑头呆鱼的产卵基板28附录E（资料性附录）可接受的稀释水的一些化学特性29附录F（资料性附录）卵黄蛋白原加强样品和分析方法间参比标准30附录G（资料性附录）统计分析流程31参考文献.I SN/T3524—2013前言本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。本标准参考了经济合作与发展组织（OrganizationforEconomicCooperationandDevelopment，OECD)TG229：《鱼类短期生殖毒性测试》（FishShortTermReproductionAssay)（英文版）。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中国检验检疫科学研究院。本标准主要起草人：程艳、崔媛、陈会明、谢文平、马萍。II SN/T3524—2013引言环境水平的化学物质与内分泌系统相互作用，危害人类和野生动物，故需要发展和验证鱼类检测内分泌干扰活性物质的技术和方法。1998年，OECD开始着手修订已有测试指南，并发展新的测试指南，以筛选和检测潜在的内分泌干扰物。其中一项重要研究内容就是发展鱼类内分泌干扰测试方法指南。鱼类短期生殖毒性测试经过了广泛的验证试验，针对所选定的化学物质，在多个实验室间进行了方法相关性和可靠性分析测试，所选定的化学物质通过各种机制包括内分泌方式来影响鱼类繁殖[1]～[5]。本测试指南（TG229）所有测试终点都已对黑头呆鱼进行了验证，一部分终点已对日本青（例如卵黄蛋白原和第二性征）和斑马鱼（例如卵黄蛋白原）进行了验证。验证部分工作已由测试方法指南组国家协调机构（theNationalCoordinatorsoftheTestGuidelineProgramme)指定的专家组完成[6]，其他的验证工作由美国环境保护局[7委托指定的专家同行评议。本测试并不识别荷尔蒙干扰的特定机制，因为受试动物拥有完整的下丘脑-垂体-性腺（HPG)轴，会对影响HPG轴的物质产生不同程度的反应。本测试方法描述了一种体内筛选测试方法，性成熟的雄鱼和处于产卵期的雌鱼放在一起，在其生命周期中暴露于化学品一段有限的时间（21d）。在21d暴露期结束时，根据所用物种，在雄性和雌性鱼上对一种或两种生物标志物终点进行测试，作为测试化学物质内分泌活性指标。这些测试终点包括卵黄蛋白原和第二性特征。对黑头呆鱼、日本青和斑马鱼可进行卵黄蛋白原测试，而第二性特征只能在黑头呆鱼和日本青上测试。此外在整个测试过程中每天都要监测定量繁殖力；性腺需要保留，可能通过病理组织学来评估测试动物的生殖健康，也为其他测试终点提供更有力的证据。此生物测试作为特定内分泌干扰模式的体内筛选测试，其应用可在“OECD内分泌干扰化学物质测试和评价框架”中看到。在这个框架内，鱼类短期生殖测试提议为等级4，作为体内试验提供有关多种内分泌干扰机制的数据。V SN/T3524--2013化学品鱼类生殖毒性试验方法1范围本标准规定了化学品对鱼类生殖毒性试验方法的方法局限性说明、测试原理、测试可接受性标准、方法描述、测试设计、试验过程、数据和报告、对于测试结果的解释和接受。本标准适用于化学品鱼类生殖毒性测试。2术语和定义下列术语和定义适用于本文件。2.1承载率loadingrate单位体积水的鱼的湿重。2. 2承载密度stockingdensity单位体积水的鱼