SNT 1942.1-2007进出口动物源性食品中布鲁氏菌属检验方法 第1部分：分离与计数方法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1942.1---2007进出口动物源性食品中布鲁氏菌属检验方法第1部分：分离与计数方法Detection of Brucella in food from animal for import and export-Part 1 : Isolation and enumeration2007-08-06发布2008-03-01实施中华人民共和国000查发布数码防伪国家质量监督检验检疫总局 SN/T 1942. 1--2007前言SN/T1942《进出口动物源性食品中布鲁氏菌属检验方法》分为两部分：第1部分：分离与计数方法；第2部分：PCR检验方法。本部分为SN/T1942—2007的第1部分。本部分的附录 A和附录B均为规范性附录。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位：中华人民共和国辽宁出人境检验检疫局、辽宁省疾病预防控制中心。本部分主要起草人：吴斌、郑秋月、姚文清、秦成、耿英芝、贾赞。本标准为首次发布的出人境检验检疫行业标准。 SN/T 1942.1—2007进出口动物源性食品中布鲁氏菌属检验方法第1部分：分离与计数方法.1范围SN/T1942的本部分规定了进出口动物源性食品中布鲁氏菌属的分离与计数方法。本部分适用于动物源性食品中布鲁氏菌属的分离与计数。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过SN/T1942的本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本部分，然而，鼓励根据本部分达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本部分。GB19489　实验室生物安全通用要求3生物安全措施为了保护实验室人员的安全，应由具备资格的工作人员检测布鲁氏菌，所有培养物和废弃物应小心处置。并按照GB19489中的有关规定进行。4设备和材料4.1显微镜:10×～100×。4.2温度计：量程1℃～55℃,分刻度0.1℃。4.3恒温培养箱：36℃±1℃。4.4 吸管:1 mL、5 mL 和10 mL,分刻度0.1 mL。4.5试管:16 mmX160 mm。4.6培养皿:直径 90 mm。4.7“L型玻璃涂布棒:直径3mm～4 mm,可涂布 45 mm～55 mm的区域。4.8接种环:3mm直径。4.9天平：量程2 kg,感量 0.1 g。4.10灭菌样品处理器具：取样勺、剪刀、镊子。4.11样品稀释瓶：250mL和500mL。4.12布鲁氏菌质控菌株：菌株目录号为羊布鲁氏菌CMCC55202，牛布鲁氏菌CMCC55008，猪布鲁氏菌CMCC55006，绵羊布鲁氏菌CMCC55305，犬布鲁氏菌CMCC55307，森林鼠布鲁氏菌CMCC55224。4.13微需氧培养设备：最佳微需氧条件为5%氧气、10%二氧化碳和85%氮气。可用具双相压力计的微需氧培养箱、厌氧罐、蜡烛缸、气袋或其他可代用的装置。5培养基和试剂除另有规定外，试剂为分析纯或生化试剂，水为蒸馏水。 SN/T 1942. 1--20075.1布氏肉汤（见第A.1章）。5.2布氏琼脂（见第A.2章）。5.3肝浸液培养基（见第 A.3章）。血琼脂(见第 A.4 章）。5.45.5革兰氏染色液。5.6胰蛋白陈琼脂(见第 A.5 章）。5.7精氨酸脱羧培养基(见第 A.6 章）。5.8革兰氏染色液。5.93%过氧化氢溶液。5.10各类糖发酵培养基。5.11硝酸盐培养基、硝酸盐试剂5.120.85%灭菌生理盐水。6检验方法6.1方法提要动物源性食品中布鲁氏菌属的分离与计数方法是应用微生物检验的增菌培养、分离、生化鉴定等方法对动物源性中可能存在的布鲁氏菌属进行定性和定量的检验。6.2检验程序布鲁氏菌属的检验程序见1。检样增菌培养皮下或腹腔接种豚鼠分离培泰：分别置微需氧(10%二氧化碳）.4 周、8周后各取一次豚鼠血液36℃±1℃培养做凝集反应，并解剖、分离培和有氧条件下，、镜检3 d后开始观察动物试验可疑菌落染色镜检凝集反应生化试验菌型鉴定报告报告图 1布鲁氏菌属的检验程序6.3布鲁氏菌属定量检验(MPN 法)6.3.1检样稀释以无菌操作将检样 25 g(mL)放于含有 225 mL灭菌生理盐水的灭菌广口瓶内，经充分振摇2 SN/T 1942. 1--2007成1：10的稀释液。固体检样用灭菌均质器，以8 000r/min～10 000r/min 的速度处理1min，做成1：10的均匀稀释液。用1mL灭菌吸管吸取 1：10稀释液1mL,注人含有 9mL灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内，振摇试管混匀，做成1：100的稀释液。另取1mL灭菌吸管，按上条操作依次做10倍递增稀释液，每递增稀释一次，换用1支1mL灭菌吸管。根据食