NY_T 2012-2011水果及制品中游离酚酸含量的测定.pdf

ICS 67.080.10B 31NY中华人民共和国农业行业标准NY/T 2012--2011水果及制品中游离酚酸含量的测定Determination of free phenolic acid in fruits and derived products2011-09-01 发布2011-12-01实施中华人民共和国农业部发布 NY/T 2012—2011前言本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草本标准由中华人民共和国农业部种植业管理司提出。本标准由全国果品标准化技术委员会(SAC/TC 501)归口。本标准起草单位：中国农业科学院柑橘研究所、农业部柑橘及苗木质量监督检验测试中心。本标准主要起草人：焦必宁、赵其阳、王成秋、苏学素、付陈梅。I NY/T 2012—2011水果及制品中游离酚酸含量的测定1 范围本标准规定了水果及其制品中游离酚酸(包括咖啡酸、香豆酸、阿魏酸和芥子酸)含量液相色谱的测定方法。本标准适用于水果及其制品中游离酚酸(包括咖啡酸、香豆酸、阿魏酸和芥子酸)含量的测定。本标准定量测定范围:咖啡酸、香豆酸、阿魏酸和芥子酸均为1.0mg/L～200mg/L。本标准定量限：咖啡酸、香豆酸、阿魏酸和芥子酸均为 1.0 mg/kg。本标准检出限:咖啡酸0.6mg/kg,香豆酸0.5mg/kg,阿魏酸0.6mg/kg,芥子酸0.7mg/kg。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法3原理试料中的游离酚酸用有机溶剂提取，浓缩定容，微孔滤膜过滤，高效液相色谱法测定，外标法定量。4试剂和材料除非另有说明,在分析中仅使用确认为色谱纯的试剂和GB/T 6682 规定的一级水。4.1 乙酸(CH:COOH,CAS 号 64-19-7),优级纯。4.2 乙醚[(CH;CH2)2O),CAS 号 60- 29 -7]。4.3 乙酸乙酯(CH:COOCH2CH: CAS 号 141- 78-6)。4.4 甲醇(CH;OH,CAS号 67-56-1)。4.5乙酸溶液（体积分数1%）：量取10mL乙酸，用水定容至1000mL。4.6咖啡酸标准品（CAS号331-39-5,纯度大于99.0%）。4.7香豆酸标准品（CAS号501-98-4,纯度大于99.0%）。4.8阿魏酸标准品（CAS号1135-24-6,纯度大于99.0%）。4.9芥子酸标准品(CAS号530~59-6,纯度大于99.0%）。4.10酚酸标准品储备溶液：分别称取100mg(精确到0.1mg)的酚酸标准品（4.6,4.7,4.8,4.9），用甲醇(4.4)溶解定容到10mL的棕色容量瓶中，配制成质量浓度为10 mg/mL的标准储备溶液，于一20℃冰箱中贮存。5仪器和设备5.1高效液相色谱仪：配有紫外检测器(UV)。5.2分析天平：感量0.01g和0.0001g。5.3组织捣碎机。5.4　旋转蒸发仪。1 NY/T 2012—-20115.5 滤膜:0.45 μm,有机相。6 分析步骤6.1试样制备6.1.1果实样品，取可食部分缩分后将其切碎，放人组织捣碎机中匀浆后取样。6.1.2果酱、果汁及饮料样品，充分混匀后直接取样。6.1.3罐头样品，按四分法进行缩分后，放人组织捣碎机中匀浆后取样。6.1.4果脯蜜饯类，按四分法进行缩分后,将其切碎充分混匀后取样。6.2提取净化平行称取两份试料，每份试料10g(精确到0.01g)于50mL容量瓶或锥形瓶中,加10mL乙醚一乙酸乙酯（1十1)振荡萃取2min,分液,重复3次，合并有机相并转人蒸馏瓶中，40℃减压旋转浓缩至干,残渣溶于1.00mL甲醇(4.4)中,经滤膜(5.5)过滤，上机待测。6.3仪器参考条件色谱柱:C1s色谱柱(粒度5μm,4.6mm×250 mm)或同等性能的色谱柱柱温：30℃。进样量:10μL。检测波长：320 nm。流动相：见表1。表1流动相梯度洗脱程序B相(甲醇)时间流速A相(乙酸溶液)%%mL/minmin90100. 9030700.903210 900.904010900. 9050100. 9090516590100. 906.4标准工作曲线分别吸取酚酸标准储备溶液（4.10)各0.05mL、0.10mL、0.15mL、0.20mL、0.25mL，用甲醇稀释定容到50mL的棕色容量瓶中，配制成标准工作溶液，经0.45um有机相微孔滤膜过滤，按6.3进行测定（色谱图参见附录A）。以酚酸质量浓度为横坐标，相应的积分峰面积为纵坐标,计算标准曲线或求线性回归方程。6.5测定做两份试料的平行测定。取10μL试样溶液和相应的标准工作溶液