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自动化法医dna提取系统在骨骼及磨牙中的应用 提取骨骼和牙齿的dna方法包括ctagram法。 1 材料和方法 1.1 材料表面 选取骨骼33份, 牙齿15份 (每份2枚) , 均来自于日常检案中的不同个体。 1.2 主要设备和试剂 1.2.1 仪器 Auto Mate Express 1.2.2 试剂 Prep Filer Express BTA 1.3 方法 1.3.1 研磨成骨粉的制备 33份骨骼用刀将骨骼内、外表面均刮干净, 清洗后晾干, 在紫外灯下照射2 h。在骨密质部位取一小块骨片用冷冻研磨机研磨成骨粉。此外, 随机选取其中10份已清洗好的骨骼用电钻在骨密质部位钻取制成骨屑 (手工处理) 。 15份牙齿 (每份2枚) 用刀片将表面刮干净, 75%乙醇溶液及去离子水分别浸泡牙齿10 min, 在紫外灯下照射2 h。取其中一枚牙齿用冷冻研磨机研磨成牙粉。此外, 随机选取其中10份已清洗好的另一枚牙齿用牙齿粉碎器砸成粉末 (手工处理) 。 1.3.2 样本量与消化时间的分组 随机选取用冷冻研磨机研磨的骨粉及牙粉样本共10份 (骨粉6份, 牙粉4份) , 根据不同的样本量 (50、100、150 mg) 及消化时间 (2、18 h) 将每份样本分成6组。根据所得DNA含量选择最佳样本量及消化时间。 1.3.3 自动响应 取骨粉或牙粉置于管中, 加入Prep Filer Express BTA 1.3.4 pcr扩增条件 采用Identifiler誖Plus试剂盒在9700扩增仪上进行扩增。扩增体系为10μL, 其中反应液4μL, 引物2μL, DNA 4μL。扩增条件为95℃11 min;94℃20 s, 59℃3 min, 59℃3 min, 30个循环;60℃30 min。PCR产物用3130XL遗传分析仪电泳检测, Gene Mapper ID-X软件对结果进行分型。 2 结果 2.1 样本量大小对检测效果的影响 表1显示, 消化时间对DNA质量浓度的影响差异无统计学意义 (P0.05) , 而样本量为50 mg的检材得到的DNA质量浓度明显低于样本量为100 mg与150 mg的检材 (P0.05) 。虽然样本量为100 mg与150 mg的检材得到的DNA质量浓度差异无统计学意义 (P0.05) , 但从STR分型效果来看, 样本量为150mg的检材其RFU值及峰值均衡性均优于样本量为100mg的检材。经过对样本量及消化时间的综合比较, 本方法采用样本量为150 mg及消化时间为2 h来提取所有的骨骼及牙齿样本。 2.2 冷研磨机研磨样品的dna质量浓度和str分类结果 经冷冻研磨机研磨的33份骨骼及15份牙齿样本采用Auto Mate Express 2.3 冷研磨样品与工艺处理样品获得的dna质量浓度的比较 取冷冻研磨法和手工处理法处理后的各10份骨骼及牙齿样本, 均采用Auto Mate Express 2.4 案例应用 本实验室曾在2008年12月对1例清代遗骸 (约150年以上) 进行DNA检验, Y-STR分型与后代完全一致 3 不同处理方法所获得dna质量浓度的比较 骨骼及牙齿中DNA含量低, 又有坚硬的细胞外基质保护, 使得此类检材的检验难度较大。检验步骤复杂繁琐、易污染、检出成功率低、取材量大、耗时长等问题一直以来都无法得到有效解决。 本研究采用Auto Mate Express 骨骼类样本使用冷冻处理与手工处理所获得的DNA质量浓度差异无统计学意义, 工作中可结合实际选择处理方法。牙齿类样本使用冷冻研磨处理获得的DNA质量浓度高于手工处理样本, 可能与液氮冷冻研磨获得的牙粉中有核细胞暴露更多有关。 因此, 在具备Auto Mate Express