NY 919-2004饲料中苯并（a）芘的测定 高效测相色谱法.pdf

ICS 65.120B 46NY中华人民共和国农业行业标准NY/T 919--2004饲料中苯并（a）芪的测定高效液相色谱法Determination of benzo(a)pyrene in feeds-High performance liquid chromatography2005-01-04发布2005-02-01实施中华人民共和国农业部发布 NY/T 919—2004前言本标准在参阅了国内、外大量文献基础上,经过方法筛选,确立了用高效液相色谱法测定饲料中苯并(a)芘含量。本标准由中华人民共和国农业部提出。本标准由全国饲料工业标准化技术委员会归口。本标准主要起草单位：农业部饲料质量监督检验测试中心(沈阳)。本标准起草人：徐国荣、田晓玲、曹东、柏云江、张建勋、田颖、徐世行。I NY/T 919--2004饲料中苯并（a)芘的测定高效液相色谱法1范围本标准规定了用高效液相色谱仪测定动物饲料中苯并(a)芘的方法。本标准适用于配合饲料、浓缩饲料、添加剂预混合饲料中苯并(a)芘的测定，检测限为2.5μg/kg。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件,其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准。GB/T6682分析实验室用水规则和试验方法GB/T14699.1　饲料采样方法3原理试样中的苯并(a)芘经环已烷提取,再经二甲基亚砜萃取。试样溶液过C18小柱，用环已烷洗脱。将洗脱液于旋转蒸发器上蒸干,残渣用乙腈溶解，于高效液相色谱仪测定。4试剂和材料除另有规定外,仅使用分析纯试剂。水,GB/T 6682，二级用水。4.1乙腈色谱纯。4.2环已烷加活性炭重蒸馏。4.3二甲基亚砜4.4甲醇色谱纯。4.5标准溶液4.5.1标准贮备液准确称取苯并(a)花标准品（纯度≥97%、HPLC级)10mg，置于100 mL量瓶中,加乙睛溶解并稀释至刻度该贮备液浓度为100ug/mL。置4℃冰箱中保存(可保存2个月）。4.5.2标准工作液准确吸取 1mL的标准贮备液(4.5.1）,置于100 mL量瓶中,用乙腈稀释至刻度。分别准确吸取-定体积的该溶液,加乙腈制成浓度为25ng/mL、50ng/mL、75ng/mL、100ng/mL、150ng/mL、200ng/mL 的标准工作液。5仪器设备5.1实验室常用仪器设备1 NY/T 919-—200415.2高效液相色谱仪配紫外检测器。5.3离心机3 000 r/mino5.4超声波震荡器5.5旋转蒸发器65℃。5.6C8净化富集柱250 mg。5.7分析天平感量 0.000 1g。5.8天平感量0.001g。6试样制备按照GB/T14699.1饲料采样方法采样，选取具有代表性的样品，至少500g，用四分法缩减至200g,经粉碎,全部过1mm孔筛,装入磨口瓶中备用。7 分析步骤7.1试样溶液的制备称取试样10g，准确至0.002g，置于250mL具塞三角瓶中。加人环已烷(4.2)30mL，超声振荡25min，倾出上清液。残渣2次分别加人环已烷（4.2)20mL，超声振荡20min。合并3次提取液，离心(3000r/min)5min。上清液于旋转蒸发器上(65℃)浓缩至约5mL。用吸管将浓缩液转移至100mL分液漏斗中,用5mL环已烷(4.2)分数次洗涤蒸馏瓶洗液合并于分液漏斗中。依次用10mL、5mL二甲基亚砜（4.3)缓慢振摇提取2次，静置10min后，分离二甲基亚砜层（下层）于三角瓶中,加人25mL水，摇匀。过Ci8净化富集柱(使用前，用20mL甲醇（4.4)、20mL水过柱活化）,用10mL水淋洗，抽干。用30mL环已烷(4.2)洗脱(洗脱速度为2mL/min)。洗脱液于旋转蒸发器上(65℃)蒸干,用2mL乙腈(4.1)溶解残渣,过0.45um微孔滤膜,待测。7.2测定7.2.1高效液相色谱条件色谱柱:Cig柱,柱长200 mm,内径 4 mm,粒度 5 μmo流动相:乙腈一水,75+25。波长:UV296 nm。流速:2.0 mL/minc进样量:10μL。7.2.2定量测定按仪器操作规程操作。取待测液和标准工作液（4.5.2)，作单点或多点校准，以色谱峰面积积分值定量。8结果计算8.1 试样中苯并(a)芘的含量按式(1)计算:2 NY/T 919-2004(1)m式中:-试样中苯并(a)芘的含量,单位为微克每千克(μg/kg);C-试样中苯并(a)芘的响应值在标准曲线上对应的浓度，单位为纳克每毫升(ng/mL)；m—试样质量,单位为克(g);试样稀释的体积,单位为毫升(mL)。8.2测定结果用平行测定的算数平均值表示