DB34T 2996-2017猪链球菌检验操作规程.docxVIP

ICS 11.220 B 41 安 徽 省 地 DB34 方 标 准 DB 34/T 2996—2017 猪链球菌检验操作规程 Protocol of examination for Streptococcus suis 文稿版次选择 2017 - 12 - 30 发布 2018 - 01 - 30 实施 安徽省质量技术监督局 发 布 I DB34/T 2996—2017 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。 本标准由安徽农业大学、安徽浩翔农牧有限公司提出。 本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。 本标准起草单位： 安徽农业大学、安徽浩翔农牧有限公司、合肥市动物疫病预防控制中心、东至县 畜牧兽医局。 本标准主要起草人：李郁、孙裴、高亚飞、黄晓慧、何宗来、吴华健、魏建忠、王希春、郑新勇、 钱昌银。 1 DB34/T 2996—2017 猪链球菌检验操作规程 1 范围 本标准规定了猪链球菌检验的设备和材料、检验程序、操作步骤、结果报告、废弃物无害化处理与 人员安全防护。 本标准适用于猪链球菌的检验。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件， 仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB 4789.28 食品安全国家标准 食品微生物学检验 培养基和试剂的质量要求 GB 19489 实验室 生物安全通用要求 SN/T 2025 动物检疫实验室生物安全操作规范 SN/T 2984 检验检疫动物病原微生物实验活动生物安全要求细则 3 主要设备和材料 3.1 显微镜：物镜 10 倍~100 倍。 3.2 电子天平：感量 0.1 g。 3.3 培养箱：36℃±1℃。 3.4 冰箱：2℃~10℃。 3.5 全自动细菌鉴定系统。 3.6 pH 计、pH 比色管或精密 pH 试纸。 3.7 饱和氯化钠溶液：见附录 A 中 A.1。 3.8 30％甘油缓冲盐水溶液：见附录 A 中 A.2。 3.9 革兰氏染色液：按照 GB 4789.28 的规定执行。 3.10 姬姆萨染色液：按照 GB 4789.28 的规定执行。 3.11 荚膜染色液：按照 GB 4789.28 的规定执行。 3.12 血液琼脂培养基：按照 GB 4789.28 的规定执行。 3.13 选择性普通绵羊血琼脂培养基：见附录 A 中 A.3。 3.14 选择性 THB 肉汤：见附录 A 中 A.4。 3.15 磷酸盐缓冲液(PBS)： 按照 GB 4789.28 的规定执行。 3.16 过氧化氢试剂：按照 GB 4789.28 的规定执行。 3.17 糖发酵培养基：按照 GB 4789.28 的规定执行。 3.18 醇发酵培养基：按照 GB 4789.28 的规定执行。 3.19 七叶苷培养基：按照 GB 4789.28 的规定执行。 3.20 马尿酸钠培养基：按照 GB 4789.28 的规定执行。 2 DB34/T 2996—2017 4 检验程序 猪链球菌检验程序见图1。 图1 猪链球菌检验程序 5 操作步骤 5.1 采样、运输和保存 5.1.1 对病猪，最急性和急性病例可无菌采集死亡猪的心、肝、肺、肾、脾、淋巴结等组织，慢性病 例如关节炎型一般采取关节液及周围组织；对活猪，可采取扁桃体拭子、鼻腔拭子。 5.1.2 脏器组织样品采集后需延迟送检的， 可保存于饱和氯化钠溶液或 30％甘油缓冲盐水溶液中， 保 存时间不超过 72 h。 5.1.3 样品均需采取低温(4~8℃)保存和运输。 5.2 显微镜检查 5.2.1 采集的样品制成触片，革兰氏染色，镜检。 5.2.2 猪链球菌形态学特征：革兰氏阳性球菌，菌体直径约 1 m， 链状排列，链长短不一，链的长短 常与细菌的种类及生长环境有关，固体培养物以双球菌为多，少量呈 3 个~5 个排列的短链，液体培 养物以链状为主，无芽孢，能形成荚膜。 5.3 分离培养 5.3.1 送检菌株的分离 划线接种于血液琼脂平板，36℃±1℃培养 24 h±2 h，如菌落生长缓慢，可延长至 48 h±2 h， 使之形成单个菌落，以供鉴定用。 3 DB34/T 2996—2017 5.3.2 病料的分离和触片检查 用经火焰灭菌并冷却的接种环蘸取病料内部组织后划线接种于血液琼脂平板，于 36℃±1℃培养 24 h±2 h， 如菌落生长缓慢，可延长至 48 h±2 h 后观察。同时取病料做组织触片，姬姆萨染色后镜 检，如见球菌则表明病料中可能含有链球菌。 5.3.3 扁挑体和鼻腔拭子的分离 扁桃体和鼻腔拭子样品加入