SN_T 3464-2012鸭病毒性肝炎I型检疫技术规范.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 3464—2012鸭病毒性肝炎I型检疫技术规范Quarantine protocol for duck viral hepatitis serotype I2013-07-01实施2012-12-12 发布中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局快 SN/T 3464—2012前言本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。本标准修改采用了OIE陆生动物诊断试验和疫苗手册2010版2.3.8.B中的诊断技术部分内容，涵盖了病毒分离与鉴定、PCR方法及中和试验，增加了荧光PCR方法。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国吉林出人境检验检疫局、中华人民共和国江苏出人境检验检疫局、中华人民共和国惠州出人境检验检疫局、吉林农业大学。本标准主要起草人：王伟利、宋战昀、姜焱、李影、孟庆峰、肖成蕊、周宇、孟日增、刘阳、刘和平、吴连鹏、石建平、王振国。I SN/T 3464—2012鸭病毒性肝炎I型检疫技术规范1范围本标准规定了鸭病毒性肝炎I型检疫技术规范，包括病毒分离与鉴定、PCR及荧光PCR方法、血清中和试验等诊断技术。本标准适用于进出境鸭病毒性肝炎I型的检疫、疫情监测和流行病学调查。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682　分析实验室用水规格和试验方法3缩略语下列缩略语适用于本文件。DVH:鸭病毒性肝炎DHV I:鸭病毒性肝炎I型病毒DEL:鸭胚肝细胞DEK:鸭胚肾细胞FCS:胎牛血清4临床诊断4. 1 发病症状鸭病毒性肝炎I型（duck viral hepatitis Serotypé I,DYH I）是由鸭病毒性肝炎病毒 I型（DHVI）引起的雏鸭的一种急性高度致死性传染疵，主要侵害 4胤龄以内的雏鸭，特别是不足1周龄的雏鸭最易感染，死亡率可达90%以上。感染初期病鸭精神萎靡、缩颈、翅下垂、呆滞、共济失调；食欲减退，厌食；半天至一天后，身体失去平衡歪向一侧，发生全身性抽搐，两腿痉挛式划动。死时头向后仰，呈脚弓反张姿势。最急性病鸭,常未见任何异常,而突然抽搐痉挛死亡。病程短,可在 1 d～2 d 内死亡。-个鸭群感染3d～4d后可以全部死亡，但大多数在第二天死亡。4.2 病理变化剖检可见病变主要发生在肝脏，肝脏肿大、有点状或斑状出血，也有可能伴有明显的脾脏肿大、肾肿胀和肾血管充血。肝脏显微病变的特点是肝细胞广泛坏死和胆管增生，不同程度的细胞炎性反应和出血。4.3 流行病学该病一年四季均可发生。病鸭及隐性带毒成鸭是主要的传染源。在自然界条件下，本病只发生于1 SN/T 3464—2012雏鸭，雏鹅亦可感染。主要是4周龄内的雏鸭发病，成鸭呈隐性感染，目前，发病日龄有增大趋势。该病多与沙门氏菌、大肠杆菌、曲霉菌、鸭疫里默氏杆菌、鸭霍乱等混合或继发感染。本病通过消化道和呼吸道感染，无垂直传播。母源抗体的高低是本病发生的主要因素，饲养管理不良，缺乏维生素和矿物质，鸭舍潮湿、拥挤，均可促使本病的发生。康复鸭仍然可从粪便中排毒，粪便对环境污染，在鸭病毒性肝炎的传播中起重要作用。近年来临床上在较大日龄鸭群或已作免疫接种的鸭群发生本病时，病例常缺乏典型的病理变化，仅见肝脏稍肿大、淤血，表面有末梢毛细血管扩张破裂而无严重的斑点状出血，易造成误诊、漏诊，必须经过病原分离鉴定确诊。5 病毒分离与鉴定5. 1仪器、材料与试剂5.1.1仪器生物安全柜、高速冷冻离心机、研钵、孵化箱、组织匀浆器。5.1.2材料移液器（200 μl～1000 μL,20 μL～200 μL)及吸头、吸管（5 ml，10 mL）、5 ml离心管、一次性注射器（1 mL，5mL）、细胞培养瓶、微孔滤膜（0.22μm）、手术剪刀和手术镊子。5.1.3试剂除特别说明以外，本标准所用试剂均为分析纯，试验用水应符合GB/T6682分析实验室用水规格。生理盐水、青霉素、链霉素、Hanks平衡盐溶液、Hanks无钙镁平衡盐溶液、抗菌素溶液、胰酶消化液、细胞培养液、维持液、琼脂维持液、稀释液、细胞生长液（见A.1～A.10）、新生牛血清。5.2实验动物1～7日龄健康雏鸭、10～14 日龄健康鸭胚或8～10 日龄 SPF鸡胚、DEL细胞（见 B.1）。5.3病料采集与处理无菌采集的病鸭肝脏用灭菌生理盐水制成20%的匀浆，3000r/min离心30min，取上清液经0.22μm微孔滤膜过滤，加人抗菌素至终浓度为青霉素20001U/mI，链霉素2000μg/mL，作为待检样品备用。5.4 病毒分离试验5.4.1动物接种试验取对DHV I型易感的1～7日龄雏鸭5只，皮下