QB_T 5397-2019大豆食品中异黄酮含量的测定.pdf

ICS 67.060X 04QB中华人民共和国轻工行业标准QB/T 5397—2019大豆食品中异黄酮含量的测定Determination of soybean isoflavones in soyfoods2019-08-02发布2020-01-01实施中华人民共和国工业和信息化部发布 QB/T 5397—2019前 言本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草本标准由中国食品工业协会提出并归口。本标准起草单位：苏州金记食品有限公司、中国食品工业协会豆制品专业委员会、国家大豆产业技术研发中心加工研究室、吉林农业大学食品科学与工程学院、四川省食品药品检验检测院、祖名豆制品股份有限公司、上海清美绿色食品（集团)有限公司、深圳市福荫食品集团有限公司、山东禹王生态食业有限公司、长春维石检测技术服务有限公司、上海市豆制品行业协会、合肥市豆制品行业协会。本标准主要起草人：吴月芳、金兴仓、于寒松、曾祥博、岳清洪、韩晓华、张凡芝、杨金平、刘军、王猛、张建秋、张之斌、孙玉坤。I QB/T5397—2019大豆食品中异黄酮含量的测定1范围本标准规定了大豆食品中异黄酮（大豆苷、染料木苷、大豆苷元、染料木素、黄豆黄素、黄豆黄苷)含量测定的高效液相色谱法。本标准适用于原料大豆及豆浆、豆腐、腐乳等大豆食品中异黄酮含量的测定。本标准测试方法的线性范围：0.5μg/mL100μg/mL。本标准测试方法的检出限：2.5μg/kg。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682一2008分析实验室用水规格和试验方法3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1大豆异黄酮soybean isoflavones大豆生长过程中形成的一类次生代谢产物，以异黄酮葡萄糖苷和相应苷元形式存在的物质，包括大豆苷（Daidzin）、染料木苷（Genistin）、大豆苷元（Daidzein）、染料木素（Genistein）、黄豆黄素（Glycitein）、黄豆黄苷（Glycitin）。其分子式如下：大豆苷（C21H2oO。）、染料木苷（C21H2oO1o）、大豆苷元（CisHi1oO4）、染料木素（C15H1oOs）、黄豆黄素（C16H12Os）、黄豆黄苷（C22H22O1o）。4原理样品经过乙睛-水溶液振荡提取，提取液经离心、浓缩后用甲醇溶液（体积分数80%）定容、过滤，经高效液相色谱分析（C18柱分离），在260nm条件下测定，依据保留时间定性，用外标法定量。5试剂和材料本标准使用符合GB/T6682一2008规定的一级水。除另有规定仅使用分析纯试剂。5.1试剂5.1.1 甲醇(Methanol,CH;OH):色谱纯。5.1.2乙腈（Acetonitrile,C2HN)：色谱纯。5.1.3二甲基亚砜(DMSO,CzHOS)。5.1.4 冰醋酸(Acetic Acid,CH;COOH)。1 QB/T5397—20195.2试剂配制5.2.1甲醇溶液（体积分数80%）：取800mL甲醇（5.1.1)用水定容至1000mL，混匀。5.2.2二甲基亚砜-乙腈-甲醇溶液（1：2：2体积比）：取10mL二甲基亚砜（5.1.3）和20mL乙腈（5.1.2）用80%甲醇（5.2.1)定容至50mL，混匀。5.2.3乙酸溶液（体积分数0.1%）：取1mL冰醋酸（5.1.4)用水定容至1000mL，混匀。5.2.4乙酸乙腈溶液（体积分数0.1%）：取1mL冰醋酸（5.1.4），用乙腈（5.1.2）定容至1000mL，混匀。5.3标准品5.3.1大豆苷元（Daidzein，CisH1o04，CAS号：486-66-8纯度：≥98%）。5.3.2 染料木素(Genistein,Cis H1oOs,CAS 号:446-72-0,纯度:≥98%)。5.3.3黄黄豆黄素（Glycitein，C1H12Os，CAS号：40957-83-3，纯度：≥98%）。5.3.4大豆苷(Daidzin,C21H2oOg,CAS号：552-66-9,纯度：≥98%)。5.3.5染料木苷（Genistin，C21H2O1o,CAS号：529-59-9,纯度：≥98%）。5.3.6黄豆黄苷(Glycitin,C2 H2O1o,CAS号:40246-10-4,纯度:≥98%)。5.4标准品配制5.4.1大豆异黄酮标准储备溶液：使用分析天平（6.2)分别准确称取6种大豆异黄酮标准品5mg分别置于容量瓶中，加人5mL二甲基亚砜-乙睛-甲醇溶液（5.2.2），充分溶解，配制成1mg/mL的单标标准储备液。一18℃避光保存，有效期6个月。5.4.2大豆异黄酮单标标准中间溶液：分别移取0.5