酶的分子修饰考研考点总结.pdfVIP

酶的分子修饰考研考点总结 ●定义 通过各种方法使酶分子的结构发生某些改变，从而改变酶的某些特性和功能的技术过 程称为酶分子修饰 。 ●意义 ●提高酶活力 ●增强酶的稳定性 ●降低或消除酶的抗原性 ●半衰期得以延长 ●最适pH 更接近生理环境 ●Km 变大 ●研究和了解酶分子中各组成单位和物理因素对酶分子空间构象的影响 ●基本要求和条件 ●基本要求：对酶有足够的了解 ●酶的稳定性 ●酶活性中心的状况 ●条件：尽量使酶稳定 ●pH 与离子强度 ●修饰反应的温度与时间 ●酶与修饰剂的比例 ●修饰方法 ●金属离子置换修饰 ●酶的分离纯化 ●除去原有金属离子 ●加入置换离子（一般为二价） ● 大分子结合修饰 ●非共价修饰 使用一些能与酶非共价地相互作用而又能有效地保护酶的一些添加物，如聚乙 二醇、右旋糖苷等，它们既能通过氢键固定在酶分子表面，也能通过氢键有效 地与外部水相连，从而保护酶的活力 ●共价修饰 例如用聚乙二醇修饰超氧物歧化酶 ，不仅可以降低或消除酶的抗原性，而且提 高了抗蛋白酶的能力，延长了酶在体内的半衰期从而提高了酶药效。 ●步骤 ●修饰剂的选择（水溶性大分子） ●修饰剂的活化 ●修饰（将酶液与修饰剂混合） ●分离 ●聚乙二醇被广泛用于酶的修饰 ●侧链基团修饰 ●肽链有限水解修饰（主链修饰） 利用酶分子主链的切断和连接，使酶分子的化学结构及其空间结构发生某些改变， 从而改变酶的特性和功能的方法 ●氨基酸置换修饰（定点突变） ●基因序列分析 ●蛋白结构分析 ●酶活性中心分析 ● 引物设计进行定点突变 ●酶基因克隆表达 ● 变异特性分析 ●酶分子的物理修饰 不改变酶的组成单位及其基团，酶分子中的共价键不发生改变，只是在物理因素的 作用下，副键发生某些变化和重排 ●酶的定向进化 所谓酶的体外定向进化，又称实验分子进化，属于蛋白质的非合理设计，它不需事先 了解酶的空间结构和催化机制，通过人为地创造特殊的条件，模拟自然进化机制(随机 突变、重组和自然选择) ，在体外改造酶基因，并定向选择出所需性质的突变酶 ● 突变：引入随机突变位点 ●易错PCR ●DNA 改组 ●交错延申重组：将常规得退火和延申合并为一步 ●表达：在宿主内表达蛋白 ●筛选：舍弃不合要求的突变体 ●循环：基于筛得得最优突变体，重复上述过程