SBT 10316-1999孢子发芽率测定法.pdf

备案号：2743-1999中华人民共和国行业标准SB/T 10316-1998孢子发芽率测定法代替ZB X 66029—87Determination of the rate of conidisgermination本方法适用于酿造酱油时在制品菌种孢子发芽率的测定。1仪器及试剂a.凹玻片、盖玻片、显微镜;b.恒温箱；;c．生理盐水、无菌水、察氏培养基;d.接种环、酒精灯等。2 操作2.1制备悬浮液：取种曲少许入盛有25mL事先灭菌的生理盐水和玻璃珠的锥形瓶中，充分振摇约15min，务使孢子个个分散，制成孢子悬浮液。2.2制作标本：先在凹玻片的凹窝内滴入无菌水4滴，再将察氏培养基融化并冷却至45～50℃后，接入孢子悬浮液数滴。充分摇匀后，用玻璃棒以薄层涂布在盖玻片上，然后反盖于凹玻片的窝上，四周涂凡士林封固。放置于 30～32℃恒温箱内培养3～5h。2.3镜检：取出标本在高倍镜头下观察孢子发芽情况，逐个数出发芽孢子数和未发芽孢子数。3 计算发芽率（%）X100A发芽孢子数，个；式中：a-发芽及不发芽孢子总数，个。A--4 注意事项4.1为了正确起见，要同时制作两张以上标本片镜检，取其平均值。4.2悬浮液制备后要立刻制作标本培养，时间不宜放长。4.3培养基中接入悬浮液的数量，应根据视野内孢子数多少来决定，一般以每视野内有 10～20个孢子为宜。1999-04-15 实施国家国内贸易局1999-04-15批准228 SB/T 10816-19994.4每次镜检，要在不同视野中连续观察100～200个孢子的发芽情况。4.5由于发芽快慢与温度有密切关系，所以培养温度要严格控制。为了加速发芽，可提高培养温度至35℃左右，但必须与30～32℃法进行对照。4.6菌种不同，驯化程度不同，测定用培养基配方允许稍有不同，例如3.951菌种可在察氏培养基中加几滴豆饼煮出液。4.7察氏培养基配方如下：硝酸钠 3g 磷酸氢二钾氯化钾　·0.5g1g硫酸亚铁0.01g蔗糖 20g硫酸镁0.5g蒸馏水　1000mL琼脂20g将上述药品按顺序溶解后，加入琼脂加热溶化。分装15×150mL试管中，加压灭菌后备用。附加说明：本标准由 国家国内贸易局提出。本标准由上海市酿造科学研究所起草。本标准主要起草人须凤高。229