四川引种的不知火柑橘皮主要有效成分分析.docxVIP

? ? 四川引种的“不知火”柑橘皮主要有效成分分析 ? ? 江延玉，严敏文，张西玉，范 晶，伏秦超 （乐山师范学院生命科学学院，四川乐山 614000） “不知火”柑橘又称“凸橘”“丑橘”，是日本农水省园艺试验场于1972 年以“清见”与“中野3 号”椪柑杂交育成[1]，2000 年引入我国四川种植，主要集中在成都、眉山、乐山等地栽培。目前，“不知火”柑橘主要用于鲜果销售和果肉榨汁。柑橘皮富含黄酮类、维生素、香精油、果胶、纤维素、色素和橙皮苷等多种有效成分，但有效利用不足[2-3]。1）橘皮里的果胶非常稳定，具有增稠和胶凝特性[4]，可以用作胶凝剂、增稠剂、乳化剂和佐剂[5]，同时具有抗菌消炎和抗癌等作用。2）橘皮含有非常丰富的精油成分，是提取精油的原料之一，以D-柠檬烯为主，精油不仅用途广泛，而且具有抑菌杀菌、抗氧化活性和抗肿瘤细胞活性等作用[6]。在食物和动物饲料中加入柑橘皮精油，既可杀死食源性病原体，又可防止食品变质[7]。3）橘皮中的类黄酮和酚酸具有抗氧化、抗肿瘤、抗菌、抗炎、抗心血管、解毒护肝和抑制癌细胞生长等药理作用[8-9]。 “不知火”橘皮具有果皮厚实的特点，经测定，橘皮可占整果重量30%。目前，尚未有关“不知火”橘皮中有效成分的研究报道，故本研究基于对柑橘皮活性成分的已有研究，分别通过酸水解法、水蒸气蒸馏法和溶剂萃取法测定四川乐山、眉山、成都等地“不知火”柑橘皮的果胶、精油和黄酮的含量，为“不知火”开发运用提供一定的理论依据。 1 材料与方法 1.1 材料 “不知火”样品分别购于四川省乐山市井研县、眉山市丹棱县、成都市蒲江县，购得后保存在贴好标签的密封袋中，放置在4 ℃条件的冰箱中保存备用。 1.2 实验方法 1.2.1 果胶的制备（酸水解法） 1.2.1.1 原料预处理 称取预先制备的“不知火”干燥果皮样品各16 g，加入240 mL 的水，并置于90 ℃的水浴中5～10 min，使酶失活以防止果胶分解，将其用纱布过滤，取出果皮，用水洗涤并切成3～5 mm 的大小。然后用50～60 ℃的温水冲洗果皮，每次冲洗后，用纱布挤压果皮，重复上述步骤，漂洗。至果皮无色无异味即可[9-10]。 1.2.1.2 酸水解提取果胶 将预处理过的果皮颗入烧杯中，加入0.2 mol·L-1盐酸浸泡，将溶液的pH 值调节在2.0～2.5，并置于90 ℃数显恒温水浴中40 min。期间继续用玻璃棒搅拌。趁热用布氏漏斗过滤，将滤渣用清水洗涤直至粘度消失，然后将滤液和洗涤液合并以获得水溶性果胶提取物。 1.2.1.3 脱色 向所获滤液中加入了少量活性炭，并在80 ℃下加热20 min以使其脱色和除味。 1.2.1.4 沉淀 用冰袋围住盛有过滤后所得溶液的烧杯，迅速冷却，用6 mol·L-1冷稀氨水将pH 值调至3～4，并用玻璃棒连续搅拌。然后缓慢加入原始滤液体积的1.5 倍的95%的乙醇溶液，静置至絮凝物产生时，用尼龙布过滤以获得湿果胶。 1.2.1.5 过滤、洗涤、干燥 向湿果胶中加入30 mL 的无水乙醇洗涤，过滤并用尼龙布挤压。将脱水的果胶放入表面皿中，摊开放入60～70 ℃的电热恒温鼓风干燥箱中干燥，然后压碎成果胶。 1.2.1.6 果胶产率计算 果胶的产率根据等式(1)计算。 公式(1)中：W—果胶得率，%；m1—成品果胶质量，g；m2—果皮粉质量，g。 1.2.2 精油提取方法（水蒸气蒸馏法） 1.2.2.1 原料预处理 使用粉碎机将干燥后的“不知火”柑橘皮样品粉碎至粉末状，各称取干果皮20 g放置于500 mL蒸馏瓶中，加入蒸馏水200 mL 作为提取剂[物料、液体的比例为1∶10 (g·mL-1)]，并加入NaCl 0.3 g 作为提取助剂，利用水蒸气蒸馏装置提取2.5 h 后收集馏出液[11-12]。经静置、离心后得精油成品。若收集到的精油中含有少许水分，可加入适当的无水硫酸钠脱水后称量，再计算精油得率。 1.2.2.2 精油出油率计算 柑橘出油率采用直接称重法计算，计算公式见公式(2)。 出油率(%)=精油产品质量(g)/“不知火”果皮干重 1.2.3 黄酮提取方法（溶剂提取法） 1.2.3.1 芦丁标准曲线 取0.1 g·mL-1的芦丁标准溶液，然后在6 个10 mL带有塞子的试管中，分别对应加入芦丁标准溶液0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL。在每个试管中分别加入30%乙醇5 mL 和0.3 mL 的5% NaNO2溶液，摇匀静置6 min。然后再加入0.3 mL10%的Al2(SO4)3溶液并放置6 min。加入4%NaOH溶液4 mL，摇匀后用蒸馏水定容至10 mL，静置20 min。510 nm测出芦丁标准溶剂溶液的吸光度，重复3 次[10,13-14]，实验结果见表1。根据实验数据求出