电穿孔简介演示文稿.pptVIP

9. 仪器的测量功能 该功能使用户可以在日常的工作中经常对GPX CE模块电路中的电容器进行校正，确保实验的精确，具体的步骤如下： 断开ShockPod电击槽 连接CE模块 按下操作面板上的小数点按键 在电击前预测样品的电阻 在实验前，在电击杯里加入样品后放入ShockPod电击槽内，在 Resistance Measurement的菜单下按下“回车键” 当前第31页\共有31页\编于星期三\7点 电穿孔的背景介绍：电穿孔属于一种将外源分子导入细胞内的物理方法，将细胞处于一个瞬时的高电场条件下，这样细胞膜表面的脂双层结构就会重排，这种重排的结果使得细胞膜对环境中分子的透性大大增加，这样就可以将诸如DNA、蛋白等分子导入细胞进行各种研究。 一般而言在电穿孔的工作原理中，有2种脉冲提供的方式，即指数波和方波。Gene Pulser Xcell是 唯一的能提供上述2种波型的电穿孔系统。 所谓指数波的方式，就是将已经充电到指定电压的电容进行快速的放电，放电的方式是以指数的形式进行的（如上面的slide显示）。该种方式的电穿孔取决于2个参数，电场强度(kV/cm)和时间常数(ms)。在实验过程中，采用具体的电击杯调整电压即可调整不同的电场强度。此外，电容和电阻的具体值也可以在Gene Pulser Xcell的界面上进行设置。 进行一次脉冲：首先选择特定的电压及其他的参数，然后按下释放键即可。当充电回路闭合后就对电容进行充电，GPX含有2套电容，即在主单元上的高压回路（HV） (10, 25 and 50mF) 和在电容扩展器上的低压回路（LV ）( 最大可以扩展到 3275mF，以25mF递增) 在主单元上的电容器非常大，最大可以传送3500V的电压 ( 但是我们能让用户使用的电压范围是3000V，仪器本身具有一定的余地)。如果仅采用主单元，那么在电容的选择和电压控制的精度方面是非常有限的。而在电容扩展器上（CE， Capacitor Extender）其电容器相对较小，最大的电压数为500V，但是重复性和精度都更加好。 当电容器被充电到预定的电压后，打开充电回路，闭合放电回路，那么电流就释放到电击杯内的细胞上。 此外，在放电回路上还有一个3ohm的电阻，该电阻和样品是串联的，可以起到分流的作用，保护实验样品。 我们的GPX产品中独特的PulseTrac电路设计可以确保用户在每次的实验过程中都能获得精确的、重复性良好的电压控制。 PulseTrac电路的工作原理是：在每次电击之前，该电路都会预测整个放电回路的电阻值，并通过精确的计算使得加在样品上的电压就是实验过程中所希望的值，从而确保每次实验的重复性。 PC（Parallel Capacitor）模块的本质就是在放电回路中在样品上并联一套电阻。 在放电回路中设置PC模块的目的：如果实验样品具有很高的电阻值，那么脉冲就需要维持相当长的时间，这样对细胞是会有损伤的，长时间的电场作用会导致细胞的裂解。并联了PC模块后对样品而言电击是的电压并没有变化，但是PC模块起到了分流的作用，可以使得脉冲的时间常数大大减小，可有效的维持细胞的活性。并联了PC模块后，时间常数取决于该模块的电阻，电阻越小，那么放电的时间也就越短。 对于某些细胞而言，采用指数波进行实验特别容易导致细胞的死亡。对于这种细胞而言，采用方波的形式来进行电穿孔既可以进行有效的转染，又可以很好的保护细胞，维持细胞的活性。方波的形式通常用以下的参数来进行描述：电压、脉冲时间、脉冲次数和脉冲间的间隔时间。上述所有的参数都可以在GPX的操作界面上方便的设置。在实验结束后，GPX还可以显示实验中这些参数的具体值。 方波的本质和指数波是一样的，区别在于电压还没有下降为0的时候，电容器的放电已经被截止了。所有的方波都会有电压的细微下降，以其始的电压值的百分比计算。一般下降率不超过5%。 电容器的指数放电过程中被截止后就会形成方波，但是采用不同电压的回路会形成不同的方波脉冲。 采用方波的工作原理是：对电容器进行充电后，释放脉冲到细胞上维持所需的时间，在进行第二次脉冲前需要对电容器进行重新充电。那么脉冲间的间隔就取决于电容器充电需要的时间和具体的电压，也就是说在设置脉冲间的时间时，其值不能小于电容器充电所需的时间。 采用低压回路时，那么就需要采用CE模块，该模块的设置是可调的，所以其脉冲时间和脉冲间的间隔是可调的，比高压电路要灵活、方便很多。 1. Exponential protocol：在该选项下，用户可设置指数波的脉冲条件 2. Time constant protocol：在该选项下，用户可设置具体的时间常数及其他条件来进行指数波的脉冲条件 3. Square wave protocol：在该选项下，用户可设置方波的脉