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微藻制备生物柴油的研究进展 微藻是指具有原始细胞（如蓝藻）和真正细胞（如绿藻）的总称。它们中的大多数人是简单的细胞和多细胞，可以一起行动。他们是地球上最古老的首席制造商之一。其形态多样, 适应性强, 分布广泛, 应用极广, 如用于水产养殖、污水处理, 可提取或加工成医药保健品及化妆品, 也可作为制备生物氢气及生物柴油等生物能源的原料。 特别是目前, 使用微藻制备生物柴油成为新一轮“微藻热”的主要原因。和陆生油料植物等生物柴油原料相比, 微藻生长快、油脂含量高、单位面积的年产量高; 可以使用海水、污水或工业废气培养, 既节约了土地和淡水资源, 又绿色、清洁和环保; 还可避免地沟油、动物脂肪等来源多样、品质不稳、产量有限等缺点, 可实现全年连续稳定生产, 质量容易控制。尽管微藻具有上述众多优良特性, 但大规模培养微藻制备生物柴油尚需解决优良藻种的选育、高密度培养技术、微藻采收、脱水和高效生物反应器设计等技术问题。本文从藻种、营养因素、培养条件、营养方式及培养方式等方面, 阐述微藻高密度培养中影响微藻生长及油脂积累因素的最新研究进展, 以期为微藻生物柴油及微藻培养研究在高产油微藻培养技术方面提供参考。 1 优势藻种的筛选 由于微藻的多样性, 不同藻种或藻株间的生长状态及油脂含量相差很大。富油微藻的油脂含量可达其干重的30% - 50% , 特殊条件下有些甚至可以达到80% 。美国水生物种项目 ( ASP) 筛选的优势藻种中, 多为硅藻纲 ( Bacillariophyceae) 和绿藻纲 ( Chloro-phyceae) 藻类。微藻并不都具有生产油脂的潜力。而且通常油脂含量高的藻生长缓慢、生物量较低, 而生长较快、生物量较高的微藻其油脂含量又较低, 所以综合考虑生长速率、生物量、油脂含量、适应性及抗逆性等方面, 选择合适的藻种 ( 株) 对提升产油量、油脂品质和连续稳定生产十分关键 ( 表1 为部分具有油脂生产潜力的微株及产油情况) 。 2 微藻生长过程中的微量元素 营养元素的种类、比例以及浓度水平对微藻的生长、生物量、生物化学成分和代谢产物, 甚至是外观形态都具有不可忽视的作用。微藻生长必须的元素一般包括C、H、O、N、P、S、Si、K、Ca、Mg和Fe等, 此外还需要诸如Cu、Co、Mo、B、Zn及维生素等一些微量元素。碳、氢和氧可以从水和空气中获得, 其他营养元素需从营养盐中得到［2］。 2.1 ph值和添加量对微藻的影响 CO2是微藻光合自养的主要碳源, 一般, 藻类可利用的CO2浓度为1% ~ 5% , 有些耐高浓度CO2的藻类甚至可以达到50% 。通常空气中的CO2通过搅动或鼓气进入培养基而被藻类吸收, 适量增加CO2浓度能够明显促进藻类的生长、增加生物量和油脂产率。Nannochloropsis sp. PP983 在CO2浓度为0. 28%时油脂含量比0. 038% 时更高［3］。但是过高的CO2浓度会使培养基的p H值降低, 进而进一步影响胞外对CO2固定具有重要作用的碳酸酐脱水酶的活性以及其他营养物质的吸收, 最后限制微藻的生长。Nannochloropsisoculata NCTU - 3 在2% 的CO2浓度下具有最高的生物量和油脂产率, 超过此浓度则生物量和油脂产率较低［4］。除CO2外, 碳酸盐和碳酸氢盐也常作为微藻自养培养时的碳源, 和CO32 －相比HCO3－更容易被利用, 而且适当添加HCO3－能促进微藻的光合作用速率, 但浓度过高会由于p H值的增高而使藻类生长、生物量和油脂产量降低。 添加适量无机碳能促进藻类生长和光合作用的主要机制可能为: 通过HCO3－的主动转运和碳酸酐酶 ( Carbonic anhydrase) 调控HCO3－和CO2的相互转化, 使核酮糖-1, 5-二磷酸羧化酶/氧化酶周围的CO2浓度升高, 一方面增加CO2对核酮糖-1, 5-二磷酸羧化酶/氧化酶结合位点的竞争, 提高羧化速度; 另一方面抑制光呼吸作用, 提高净光合效率［13］。但是要想提高藻类利用CO2的效率以及在更高CO2浓度中的生长和油脂积累, 其调控过程及高浓度CO2损伤作用的机理还需进一步深入研究［5］。 2.2 微藻细胞的油脂积累 氮元素是承担微藻生长、光合作用及繁殖等生命活动过程中所涉及的蛋白质、酶等物质合成的必须元素。可供藻类利用的氮源主要有氨态氮、硝态氮、亚硝态氮, 藻类在利用这些氮源的程度上一般存在很大差别, 通常为铵态氮 硝态氮 亚硝态氮［6］。无机铵态氮可以直接通过转氨作用合成氨基酸等, 但是脱氨后会使培养液p H大幅下降从而使生物量和油脂产量降低。相比之下有机氨氮的尿素、硝态氮的硝酸钠和硝酸钾使用最为广泛, 对微藻生长和油脂积累也最为有效。Neochlorisoleoabundans UT