铁西煤气厂酚降解菌的筛选.docxVIP

铁西煤气厂酚降解菌的筛选 苯和衍生物属于芳香族化合物，是废水中常见的高毒性和难以分解的有机物质。废水中的酚类物质主要包括酚类、甲基酚、二苯二酚等酚类化合物。这是石油、化工、天然气、化工和酚类生产商在排放废水中排放的主要污染物。在不同的酚类中，酚类物质的毒性最强。进入水体后，蛋白质会变成变形和硬化。酚废水被列入中国水污染控制中的有害废水之一。沈阳世生实机厂采用良好的氧生氧化机法处理废水。本试验采用铁西气厂通风塘和沉淀池中的活性污污泥处理，对各株植物进行分离、过滤、鉴定和测定，然后选择各株植物的酚类能力。为今后的进一步调查提供基础。 1 材料和方法 1.1 培养基的制备 菌 源:沈阳市铁西煤气厂曝气池和沉淀池中的活性污泥. 培养基:牛肉膏蛋白胨培养基、分离培养基、保存培养基、惟一碳源培养基、葡萄糖蛋白胨培养液、无菌水. 革兰氏染色、荚膜染色、鞭毛染色以及生理生化所需的药品. 1.2 实验方法 1.2.1 细菌游离检测 样品取自曝气池和沉淀池,置于已灭菌的采样瓶中,迅速带回实验室.从采样瓶中取出10 mL样品加入到带有玻璃珠和100 mL无菌水的无菌三角瓶中,振荡40 min,将活性污泥打碎,使细菌游离出来. 1.2.2 细菌的分离 将菌液逐级稀释,用牛肉膏蛋白胨培养基进行平板接种分离,于32 ℃培养24 h,经反复地培养分离纯化,共分离出80株细菌. 1.2.3 抗酚试验 通过逐级提高苯酚和间苯二酚在牛肉膏蛋白胨培养基中的浓度,将上述的80株细菌接种培养,筛选出耐高浓度酚的菌株. 1.2.4 通过测定细菌在单一碳源培养基中的生长 分别以苯酚和间苯二酚作为惟—碳源,将细菌接种到培养基上,观察菌株生长情况. 1.2.5 反应和生理生化反应试验 根据细菌的个体、群体形态,革兰氏染色反应、荚膜染色反应、鞭毛染色反应和生理生化反应(淀粉水解试验、油脂水解试验、明胶水解试验、石蕊牛奶试验、葡萄糖发酵、乳糖发酵、蔗糖发酵、硫化氢试验、吲哚试验、甲基红试验、伏—普试验、柠檬酸盐试验、硝酸盐试验)等鉴定到属. 1.2.6 苯酚和间苯二酚的检测 测定细菌对酚的降解率,采用液体摇瓶法.在盛有100 mL葡萄糖培养液中,分别加入一定量的苯酚和间苯二酚.苯酚和间苯二酚的浓度分别达到50 mg/L,再接入2 mL的菌悬液.以加苯酚、间苯二酚不接菌的空白培养液作为对照,于36 ℃、160 r/min的HZQ—R振荡器中分别振荡培养12 h、16 h和24 h.苯酚和间苯二酚的测定方法采用溴化容量法,以空白培养的苯酚和间苯二酚的量作为标准,测定上述6株细菌对苯酚的降解率和上述7株细菌对间苯二酚的降解率. 2 结果与讨论 2.1 对苯酚、间苯二酚的适应能力测定 为了考察细菌对苯酚、间苯二酚的忍耐能力,把分离出来的80株细菌,在含有不同浓度的苯酚、间苯二酚培养基的平板上分别培养,考察各菌株对苯酚、间苯二酚的适应能力. 2.1.1 细菌对苯酚的等温稳定性 把80株细菌分别接种在含有不同浓度的苯酚培养基的平板上,置电热恒温培养箱中32 ℃培养24 h,观察各菌株生长情况(见表1). 从表1中可以看出,已经分离出的这80株细菌对苯酚的忍耐力是不同的.通过不断提高培养基中苯酚的浓度来筛选出忍耐苯酚能力强的6个菌株,对苯酚的最高忍耐力达到1700 mg/L. 2.1.2 细菌耐间苯二酚能力的测定 把80株细菌分别接种在含有不同浓度的间苯二酚培养基的平板上,置电热恒温培养箱中32 ℃培养24 h,观察各菌株生长情况(见表2). 从表2中可以看出,已经分纯的这80株细菌对间苯二酚的忍耐力是不同的.通过不断提高培养基中间苯二酚的浓度来筛选出忍耐间苯二酚能力强的7个菌株,对间苯二酚的最高忍耐力达到2600 mg/L. 2.2 细菌在唯一的碳源培养基中的生长 2.2.1 耐苯酚能力的检测 将筛选出的6株细菌接种到以苯酚为惟一碳源培养基(苯酚浓度达到500 mg/L)上,置电热恒温培养箱中32 ℃培养24 h,观察各菌株生长情况如下:筛选出的6株耐苯酚能力强的细菌均可在惟一碳源培养基上生长. 2.2.2 耐间苯二酚能力的检测 将筛选出的7株细菌接种到以间苯二酚为惟一碳源培养基(间苯二酚浓度达到500 mg/L)上,置电热恒温培养箱中32 ℃培养24 h,观察各菌株生长情况如下:筛选出的7株耐间苯二酚能力强的细菌有6株细菌(H5未生长)可以在惟一碳源培养基上生长. 2.3 细菌筛选和鉴定 从沈阳市铁西煤气厂的曝气池和沉淀池中取出活性污泥,经培养和反复分离纯化,分离出80株细菌,又经过忍耐苯酚和间苯二酚的考察,筛选出12株细菌.根据这12株细菌的个体、群体形态,革兰氏染色反应、荚膜染色反应、鞭毛染色反应和生理生化反应等鉴定到属.分别为假单孢菌属(Pseudomonas)、节杆菌属(Arth