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4种药剂对黄瓜灰霉病的抑菌效果 黄瓜是中国的重要蔬菜。由于大面积的栽培，疾病日益严重。为了生产无公害黄瓜,对其病虫害的防治应尽量采取生物防治,以减少环境污染程度。而作为生物防治重要组成部分的植物源农药,加速其产业化是顺应人类生活质量提高和社会进步的必然选择,是保证农业可持续发展的重要手段,是今后农药工业发展的方向。辽细辛[北细辛,Asarum heterotropoidesFr. Schmidt var.mandshuricum(Maxim)Kitag.]为马兜铃科细辛属植物,为1年生至多年生草本,我国南北各省均有分布,其根可供药用,活性成分主要为挥发油(精油),油中至少有25种成分,如甲基丁香酚、黄樟醚、优香芹酮、α-及β-蒎烯、榄香脂素、细辛醚等。笔者选用细辛精油为材料,初步探讨其对黄瓜病害的离体抑菌作用,旨在为开发植物杀菌剂提供理论依据。 1 材料和方法 1.1 精油的提取 供试植物样品为辽细辛的根部,购自辽宁省沈阳市中草药市场,将其阴干后粉碎,并过孔径为0.35 mm的筛备用。细辛精油的提取方法为超临界CO2萃取法。所用仪器为TC-SFE-42-5-120S超临界萃取设备(沈阳天诚超临界萃取有限公司制造)。称取样品1.85 kg,装入5 L的萃取罐内,超临界CO2萃取:萃取压力20 MPa,萃取温度40 ℃,流量20 kg/h;解析釜I压力6～7 MPa,温度45 ℃;解析釜II压力5～6 MPa,温度35 ℃,萃取时间为90 min,每20 min收集1次提取物,称量,密封,置4 ℃冰箱中保存备用。 辽细辛根的精油采用超临界CO2提取,1.85 kg的原料共萃取得到42 g精油,提取率为2.27%。 化学药剂:30%嘧霉胺EC,由山东京博农化有限公司生产;50%双福生WP,由青岛好利特生物农药有限公司生产;75%百菌清WP,由云南化工厂生产;70%正品甲津托WP,由美罗福农化有限公司生产。 1.2 孢菌的检测 供试菌种为引起黄瓜灰霉病的灰葡萄孢菌(Botrytis cinereaPers. Ex Fr.),由聊城大学农学院植物病理研究室提供。 1.3 给药药物的制备 1 稀释后稀释法 细辛精油:先将细辛精油用少许无水乙醇(不超过总体积的2%)充分溶解,用无菌水配制成12 000 mg/L的母液,然后用无菌水稀释成750、1 500、3 000、6 000、12 000 mg/L等5个浓度梯度,备用。化学药剂:双福生、嘧霉胺、百菌清、正品甲津托4种药剂用无菌水配制成2 000 mg/L的母液,然后稀释成为125、250、500、1 000、2 000 mg/L等5个浓度梯度,备用。 2 化学药剂:双福生、百菌清、不同药剂绿色高混合空间 细辛精油:将细辛精油用二甲基亚砜配制成3 000、6 000、12 000、24 000、48 000 mg/L等5个浓度梯度,备用。化学药剂:双福生、百菌清2种药剂用无菌水配制成0.122、0.244、0.488、0.976、1.952 mg/L等5个浓度梯度;嘧霉胺配制成15.6、31.3、62.5、125.0、250.0 mg/L等5个浓度梯度;正品甲津托配制成3.906、7.813、15.625、31.250、62.500 mg/L等5个浓度梯度。 1.4 生物测定 1 化学药剂用量试验 以生长速率法(琼胶平板法)测定各样品对灰葡萄孢菌菌丝生长的抑制作用。所用培养基为PDA培养基,细辛精油终浓度分别为75、150、300、600、1 200 mg/L;化学药剂药液浓度分别为12.5、25.0、50.0、100.0、200.0 mg/L。菌饼直径0.5 cm,每皿1块,3次重复,(21±1) ℃光照培养。待对照菌落直径在3 cm以上时,用十字交叉法测量菌落直径。根据菌落直径求抑制生长率。 菌落生长直径(cm)=2次直径平均值-0.5 菌丝生长抑制率=对照菌落直径-处理菌落直径对照菌落直径×100%=对照菌落直径?处理菌落直径对照菌落直径×100% 2 双福生、百菌清、四水回采不同剂量药剂的试验 以孢子萌发法(悬滴法)测定各样品对灰葡萄孢菌孢子萌发的抑制作用。以96孔微孔培养板代替凹槽载玻片。吸取孢子悬液78 μL与2 μL试验药液混合使之达到规定浓度(细辛精油终浓度分别为75、150、300、600、1 200 mg/L;双福生、百菌清2种药剂0.003、0.006、0.012、0.024、0.049 mg/L;嘧霉胺0.391、0.781、1.563、3.125、6.250 mg/L;正品甲津托0.098、0.195、0.391、0.781、1.563 mg/L),以二甲基亚砜2 μL+78 μL无菌水为空白对照,3次重复,12 h后观察结果。根据下列公式计算抑制率。 萌发率=