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涉县夏季正常人群和发作样病人中盖塔病毒感染状况调查 昆虫病毒有很多种类和分布。它以吸收血液为手段，通过动物和人类之间的接触传播。病毒学分类中包括14个科,其中与人畜疾病传播密切相关的主要是被膜病毒科甲病毒属、黄病毒科黄病毒属、布尼安病毒科和呼肠病毒科。自上个世纪90年代以来,我国陆续监测到多株甲病毒属虫媒病毒,对甲病毒的研究不断有许多新的发现。 盖塔病毒(GETV,Getah Virus)属于被膜病毒科甲病毒属虫媒病毒,作为甲病毒属成员之一,分离时间最早,于1964年在海南首次分离到第1株GETV(M1株),但直到1992年才在美国疾病预防控制中心得到最后鉴定,在我国甲组虫媒病毒研究中意义重大。2002年,在河北省涉县采集的蚊标本中,得到13株具有相同细胞病变特征的分离物,其中HB0215-3和HB0234两株病毒经过系统鉴定为GETV,这是我国分离的第2和第3株GETV,为我国内陆地区和北方地区首次分离的GETV。GETV对人和动物感染状况,目前仍不十分清楚。 为了解GETV是否感染人类,感染率如何,感染后是否发病以及临床表现如何,在GETV分离标本采集地涉县,我们分别于分离病毒的当年(2002年夏季)采集了部分正常人群血清,和2008年夏季采集了部分发烧样病人血清,进行GETV IgM抗体和IgG抗体筛查,并对所有观察对象进行了流行病学调查,现将抗体筛查和流行病学调查结果分析如下。 1 材料和方法 1.1 调查和收集血标本 我中心于2002年夏季采集蚊标本,同时开展正常人群流行病学调查并收集部分正常人群血标本,采集地点为涉县各乡村。2008年夏季开展对发烧样病人流行病学调查同时收集其血标本,调查和收集地点包括县医院和各个乡镇卫生院。采集静脉全血,及时分离血清,-20℃冻存备检。 1.2 测试指标 正常人群检测GETV IgM和IgG抗体;发烧样病人检测GETV IgM抗体。 1.3 检测方法 1.3.1 抗体酶活性测定 具体方法为抗体捕捉ELISA方法检测GETV IgM抗体。具体操作步骤包括包被抗人IgMμ链抗体,4℃保湿过夜,洗板后加稀释待检血清,37℃保湿温育,洗板后加单克隆抗体酶标结合物,37℃再次温育,洗板后37℃避光显色,最后测定OD值,判读结果。包被液为PH9.6、0.05M碳酸盐缓冲液,洗涤液为含0.5% 吐温-20生理盐水,底物缓冲液为PH5.0柠檬酸磷酸盐缓冲液,封闭液为含10%胎牛血清洗涤液,终止液为2M硫酸,底物为过氧化氢和邻苯二胺,酶标仪选取490nm测定OD值,判读标准:(待检血清OD值/阴性血清OD值)≥2.1为阳性,阴性血清OD值0.05时按0.05计算。 1.3.2 etv产物的检测 具体方法为间接ELISA方法检测GETV IgG抗体。具体操作步骤包括包被GETV抗原,4℃保湿过夜,洗板后加稀释待检血清,37℃保湿温育,洗板后加酶标记抗人IgG抗抗体,37℃保湿温育,洗板后37℃避光显色。实验使用的包被液、洗涤液、底物缓冲液、终止液、底物及检测条件和结果判读标准与IgM抗体检测都相同。 1.3.3 用包被液液液膜冻存 将HB0215-3和HB0234两株病毒接种到BHK-21细胞,病变收获后冻存,经病毒滴定、热灭活后,以10-1用包被液稀释后1∶100使用。 2 结果 2.1 发病时间及血清采集情况 正常人群采血时间为2002年7、8、9月,采血数量为300份,男女比例为137∶163。发烧样病人血标本采集时间为2008年夏季7、8、9、10月份,共采集血清317份。其中7月上、中、下旬各23份、15份、15份;8月上、中、下旬各47份、41份、35份;9月上、中、下旬各30份、54份、53份;10月上旬4份。 2.2 年龄及性别分布 正常人群年龄范围为1～30岁,分为6个年龄组,1岁～,5岁～,10岁～,15岁～,20岁～,25 ～30岁,每个年龄组数量各50份。发烧样病人年龄范围1～86岁,其中1岁～组18例,11岁～组30例,21岁～组40例,31岁～组50例,41岁～组59例,51岁～组64例,61岁～组35例,71～86岁组21例。 2.3 热点难度检测情况 正常人群分布于涉县3个乡镇的4个村,4个村分别采集102份、89份、84份和25份血清,其中分离到GETV的2个乡镇分别采集114份和84份血清。317例发烧样病人来自全县17个乡镇119个行政村,占全县行政村总数的38.64%;就诊于全县14所医院,其中涉县县医院就诊100例(占31.55%),分离到GETV的2个乡镇卫生院分别为64例(占20.19%)和59例(占18.61%),4所乡镇卫生院病例数在15～27例之间(4.73%～8.52%),有8所卫生院就诊数在10例以下。 2.4 感染及并发症 317例发烧样病人