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棉籽饼粕中游离棉酚含量的测定; 一般用在70%丙酮水溶液或在3-氨基-1-丙醇存在下,用异丙醇和正己烷的混合溶剂提取游离棉酚,用比色法、高效液相色谱法测定。
比色法:有苯胺法、三氯化锑法、甲氧基苯胺法、间苯三酚法、紫外分光光度法等。
苯胺比色法准确度高、精密度好,也是国标方法。
HPLC法准确度高,干扰少。HPLC法所测得的结果往往低于比色法。
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原理
在3-氨基-1-丙醇存在下,用异丙醇与正己醇的混合溶剂提取游离棉酚。苯胺与棉酚结合为苯胺棉酚,在最大吸收波长(440nm)处进行比色测定。
该方法适用于棉籽粉、棉籽饼粕和配合饲料中游离棉酚含量的测定。;样品粉碎机及分样筛
分析天平
电动振荡器
恒温水浴锅
分光光度计
容量瓶、具塞锥形瓶、玻璃漏斗、移液管、量筒、玻璃珠;(1)异丙醇;
(2)正己烷;
(3)冰乙酸;
(4)3-氨基-1-丙醇;
(5)苯胺;
(6)异丙醇、正己烷混合溶剂:6:4(V/V);
(7)溶剂A:取500ml异丙醇、正己烷混合溶剂,2ml 3-氨基-1-丙醇,8ml冰乙酸和50ml水,放入1000ml容量瓶中。再用异丙醇、正己烷混合溶剂定容至刻度。;六、操作方法
(1)游离棉酚的提取:称取1-2g棉籽饼粕样品于250ml具塞锥形瓶中,加入20粒玻璃珠。准确加入50ml溶剂A。塞紧瓶塞。于振荡器上剧烈振荡1小时(每分钟120次左右)。用干燥的定量滤纸过滤。过滤时在漏斗上加盖一表玻璃皿。弃去最初几滴滤液。收集滤液于100ml具塞锥形瓶中。
(2)以下操作见下表
;;(3)测定吸光度值:在440nm波长处以a0为参比溶液测定空白液b0的吸光度;以a为参比液测定样品测定液b的吸光度。从以b的吸光度值减去b0的吸光度值,得到校正吸光度A。
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