水产品新鲜度化学指标的检测—组胺的测定.pptxVIP

组胺的测定 ——分光光度法;;组胺的产生;组胺是一种过敏性毒物，对组胺过敏的人，吃了一口含组胺的鱼就可能引起反应。中毒症状脸红、头晕、头痛、口肉麻木、眼部充血、荨麻疹、心跳加快，胸闷呼吸急促等。 人体中毒约1.5mg/kg。发病时间快，一般在10分钟到3小时内，发病率较高（30％左右），但是症状较轻，恢复也较快，多在翌日可自行痊愈。 限量：GB2733-2015 高组胺鱼类组胺含量不超过40mg/100g； 其他??海水鱼类组胺含量不超过30mg/100g。;有色化合物 480nm; 重氮盐的形成： 甲液：对硝基苯胺0.5g，加浓盐酸5mL，溶解后，加水至200mL，冰箱储存。 乙液：亚硝酸钠0.5g，加水溶解至100mL（现用现配）;二、试剂与仪器;④50g/L碳酸钠溶 ⑤250g/L氢氧化钠溶液 ⑥(1+11)盐酸溶液 ⑦偶氮试剂: 甲液(对硝基苯胺):称取0.5g对硝基苯胺，加5mL盐酸溶液溶解后，再加水稀释至200mL，???用现配。 乙液(亚硝酸钠溶液):称取0.5g亚硝酸钠，加入100mL水溶解混匀，临用现配。 吸取5mL甲液，40mL乙液混合即为偶氮试剂，临用现配。 ;三、分析步骤;2.抽提： 正戊醇抽提：取滤液2mL于分液漏斗中，加入25％NaOH使其呈碱性。再加入3mL正戊醇，振摇分层提取，然后取正戊醇层。 酸液提取： 取正戊醇液2mL，至于另一个漏斗中，加入3mLHCl（1mol/L），混合均匀，静止5分钟，分层，取下层盐酸溶液。重复提取3次，合并提取液。 ;3.显色反应：取2.0 mL盐酸提取液于10ml比色管，加入3mL Na2CO3 ，3mL偶氮试剂，混匀，用水稀释至10mL，混合后放置10分钟，在480nm测吸光度。 4、标准曲线的绘制：取组胺标准使用液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL，加水至1mL，各加1mL HCl (1mol/L )、3mL Na2CO3 、偶氮试剂 3mL。同样操作，测定吸光度。确定组胺浓度与吸光值的关系曲线。;四、结果表述;四、结果表述;组胺的测定 ——液相色谱法;;一、原理;二、试剂;1.试剂配制 ⑦饱和碳酸氢钠溶液:称取15g碳酸氢钠，加入100mL水溶解，取上清液即为饱和溶液。 ⑧50mg/mL谷氨酸钠溶液:准确称取5.0g谷氨酸钠用饱和碳酸氢钠溶液溶解并定容至100mL。 ⑨流动相 先配制含1%乙酸的0.01mol/L乙酸铵溶液，称取0.77g乙酸铵溶解于水中，转移至1000mL容量瓶中，加入10mL甲酸，用水定容至刻度。 流动相A的配制：量取100mL含1%乙酸的0.01mol/L乙酸铵溶液加入900mL乙腈。 流动相B的配制：量取900mL含1%乙酸的0.01mol/L乙酸铵溶液于加入100mL乙腈。 ;2.标准品配制： ①组胺标准储备溶液的配制:准确称取组胺标准品适量，置于10mL小烧杯中，用0.1mol/L盐酸溶液溶解后转移至10mL容量瓶中，定容至刻度，混匀，配制成浓度为1000mg/L的标准储备溶液，置-20℃冰箱储存。 ②组胺标准混合使用液的配制:吸取1.0mL组胺标准储备溶液，置于一个10mL容量瓶中，用0.1mol/L盐酸稀释至刻度，混匀，配制成组胺标准混合使用液(100mg/L)。 ③组胺标准系列溶液的配制：分别吸取0.10mL、0.25mL、0.50mL、1.0mL、1.50mL、2.50mL、5.0mL组胺标准使用液(100mg/L)，置于10mL容量瓶中，用0.1mol/L盐酸溶液稀释至刻度，混匀，使浓度分别为1.0mg/L、2.5mg/L、5.0mg/L、10.0mg/L、15.0mg/L、25.0mg/L、50.0mg/L，临用现配。 ;④内标标准储备溶液的配制:准确称取内标标准品适量，置于10mL容量瓶中，用0.1mol/L盐酸溶液溶解后稀释至刻度，混匀，配制成浓度为10mg/mL的内标标准储备溶液，置-20℃冰箱储存。 ⑤内标标准中间使用液的配制:吸取1.0mL内标标准储备溶液于10mL容量瓶中，用0.1mol/L盐酸稀释至刻度，混匀，作为内标使用液(1.0mg/mL)。 ⑥内标标准使用液的配制:吸取1.0mL内标标准中间使用液于10mL容量瓶中，用0.1mol/L盐酸稀释至刻度，混匀，作为内标使用液(100mg/L)，临用现配。 ;三、仪器;四、分析步骤;3.净化 （1）除脂肪:移取上述试样提取液10mL于25mL具塞试管中，加入0.5g氯化钠涡旋振荡至氯化钠完全溶解后加入10mL正己烷，涡旋振荡5min，静置分层后弃去上层有机相，下层试样溶液加入10mL正己烷再除脂一次。 （2）萃取:移取5mL上述除脂肪后的试样溶液于10mL具塞离心管中，用几滴5mol/L氢氧化钠溶