酶工程酶的别构效应演示文稿.pptVIP

协同效应的生理意义 底物引起的同种负协同效应在更大的[S]范围里使V稳定，如3-磷酸甘油醛脱氢酶在低NAD+浓度时，能顺利地进行糖酵解，而当其他反应影响使NAD+浓度增加时，即使大幅度地增加NAD+（100倍以内），都可因其半位反应性而不增加酶反应速度。 底物引起的同种负协同效应 当前第31页\共有71页\编于星期一\15点 3．别构酶的其他动力学术语 ① S 0. 5 前面①式中的KS’= [S]n时， 。由 于别构酶不符合米氏动力学，我们将 时的底物浓度称为表观 Km 或 S 0. 5 。 前面的①式 当前第32页\共有71页\编于星期一\15点 别构酶的其他动力学术语 ② K型效应剂和V型效应剂 在别构效应剂中，只影响表观Km（或者说S 0. 5）的效应剂称为K型效应剂，它们与竞争性抑制剂的效应相似；竞争性抑制剂只会使Km增大，而K型效应剂根据其是激活还是抑制，分别使S 0. 5降低和升高。只影响Vm的效应剂称为V型效应剂，它们与非竞争性抑制剂的效应相似；非竞争性抑制剂只会使Vm下降，而V型效应剂根据其是激活还是抑制，分别使Vm升高和降低。 当前第33页\共有71页\编于星期一\15点 4．别构酶的通性 ① 由多个亚基组成，亚基可以是同种或异种。 ② 有调节部位和催化部位。 ③ 可结合多个配体。 ④ 配体的结合有协同效应，一分子配体与酶结合后使酶的构象改变，从而影响下一分子配体的结合。 ⑤ 根据CI值或n值可鉴别协同效应的类型。 ⑥ 其V对[S]的曲线不是双曲线，而是S形曲线（正协同）或“表观双曲线”（负协同）。 当前第34页\共有71页\编于星期一\15点 三、别构机制的模式 1．Hill模式 2．Adair模式 3．MWC模式 4．KNF模式 当前第35页\共有71页\编于星期一\15点 1．Hill 模式 Hill模式是Hill在1909年提出来的，当时是试图解释O2与血红蛋白结合的S形曲线的，后来用于别构酶反应中。以下是求Hill系数n值（协同系数）的方法： 式中 …………③ 设酶被底物饱和的分数为 ，则 …………………② 当前第36页\共有71页\编于星期一\15点 求n值的方法 由②得 …………………④ 将④代入③得 …………………② …………③ 当前第37页\共有71页\编于星期一\15点 求n值的方法 ， ， …………………⑤ ∵ ，代入⑤式得 当前第38页\共有71页\编于星期一\15点 求n值的方法 以 对 作图，可得一直线，其斜 率为n，纵轴截距为 ，横轴截距为lg S 0. 5 。 当前第39页\共有71页\编于星期一\15点 求n值的方法 当[S]过高或者过低时（[S] [S]0.9或 [S] [S]0.1），n常等于1，故在一个广泛的[S]范围内作图时，得到的是折线。 当前第40页\共有71页\编于星期一\15点 n值与底物结合位点数的关系 Hill模式忽略了ES，ES2，…ESn-1等形式的存在，由于协同效应和前述忽略不饱和结合形式的影响，根据Hill作图计算出来的n值往往小于酶对底物的结合位点数，Hb（hemoglobin，血红蛋白）上有4个O2结合位点，但计算的结果是n＝2.6～2.8。在负协同效应中，每分子酶也结合n个底物，但计算的结果却是n 1。所以Hill系数只能作为鉴别协同性的指标。 当前第41页\共有71页\编于星期一\15点 2．Adair模式 Adair模式允许有稳定的未被底物饱和的ESx复合物存在。对于一个有4个底物结合位点的酶，有 其中K1、K2、K3、K4实际上是微观或内在解离常数（microscopic or intrinsic dissociation constants），如果4分子底物是分别结合在四聚体酶的4个亚基上，则4个表观解离常数（apparent dissociation constants）为： 当前第42页\共有71页\编于星期一\15点 微观解离常数与表观解离常数的关系 取上面第二式证明如下： 当前第43页\共有71页\编于星期一\15点 Adair 模式的速度方程 ………⑥ 当前第44页\共有71页\编于星期一\15点 将5种酶存在形式的浓度表达式代入⑥式得 分子分母同乘以 得 ………⑦ 当前第45页\共有71页\编于星期一\15点 如果酶分子中4个底物结合位点是相同的，并且它们之间没有相互作用，无协同性，则内在解离常数K1= K2= K3= K4，可用Ks统一表示它