电针百会三阴交穴对慢性应激抑郁模型大鼠血浆皮质醇、促肾上腺皮质激素及下丘脑室旁核精氨酸加压素阳性神经元的影响.docxVIP

电针百会三阴交穴对慢性应激抑郁模型大鼠血浆皮质醇、促肾上腺皮质激素及下丘脑室旁核精氨酸加压素阳性神经元的影响 在本实验中，观察了针的“百会”和“三阴交”穴位对慢性抑郁模型大鼠hpa轴功能的影响。 1 材料和方法 1.1 动物中心进口 Sprague-Dawley雄性大鼠21只,体重200~230 g,北京中医药大学实验动物中心代购。置于7:00~19:00光照、19:00~7:00黑暗的实验室中,驯养1周后,随机分为正常组、模型组、电针组。 1.2 饲养1只1只 参照文献,从第8天起,正常组每笼饲养7只,其余组每笼饲养1只。除正常组外,其他各组动物开始接受21 d各种不同的应激,包括电击足底、冰水游泳、夹尾、禁水、禁食、昼夜颠倒等,每天随机安排1种,平均每种刺激使用2次。 1.3 针刺两穴,百会,三阴交 电针组于第8天起,参照《实验针灸学》取“百会”、左侧“三阴交”穴,以30号、1寸毫针进行针刺,“百会”平刺0.3~0.5寸,“三阴交”直刺0.5~0.8寸。针柄接G6805电针治疗仪,电压6 V,疏密波型,频率80 Hz,强度以局部皮肤肌肉轻微颤动为度。 1.4 样本、仪器和试剂 大鼠快速断头取血,血液收集到冰冻EDTA试管,离心分离血浆,样本在-20 ℃中保存。皮质醇(CORT)放射免疫分析药盒购自北京福瑞生物工程公司。促肾上腺皮质激素(ACTH)放免试剂盒购自天津德普生物技术有限公司。按试剂盒说明书进行操作。 1.5 精氨酸加压素免疫组化试剂 大鼠下丘脑从视交叉至正中隆起止作冰冻冠状连续切片,在室旁核处,各组取相同序号片行免疫组织化学染色。精氨酸加压素(AVP)免疫组化试剂盒购自第二军医大学,AVP抗血清浓度为1∶1000。二抗、三抗、DAB工作液购自武汉博士德公司。光镜观察各组下丘脑室旁核的AVP阳性神经元。各组每只动物取相同序号的5张切片,每张随机取2个视野,在200×光镜下用美国TN-8502图像分析仪进行分析。 1.6 显著性差异分析 数据用SPSS8.0软件进行分析,以平均值±标准差(ˉx±s)(xˉ±s)表示,组间差异采用方差分析,以P0.05作为显著性差异的标准。 2 动物脑电针治疗后vep阳性神经元表达变化 各组动物血浆CORT含量和ACTH含量经方差分析,F值分别为5.06(P0.05)和8.26(P0.01)。模型组、正常组与针刺组之间有显著的差异。LSD分析模型组较正常组有特别明显的升高,经电针治疗后显著地低于模型动物,但与正常组比较亦有差别,结果见表1。各组动物下丘脑室旁核AVP免疫阳性神经元经图像分析后平均光密度值各组间有非常显著的差别,F值为12.06,P0.01。LSD分析得出本指标模型组较正常组和治疗组均有特别显著的升高,而治疗组与正常组组间差别不明显。阳性面积百分比各组间无明显差异,F值为3.19,P0.05;但经LSD分析,模型组与正常组、治疗组间均有显著差别,P0.05。可见,模型组AVP阳性神经元含量较正常组明显增加,电针治疗后与正常值接近,结果见表2。说明慢性应激抑郁模型动物HPA轴功能亢进,电针治疗可对抗HPA轴的上调,使其功能趋于正常化。 3 药养血作用实验 本实验给予孤养大鼠长期不可预见的中等强度刺激,造成动物全身应激反应失调,HPA轴高活性的抑郁状态。而针刺作为一种应激形式同样可以促进下丘脑-垂体前叶-肾上腺皮质轴的功能,促进ACTH分泌,升高血中皮质醇含量。但针刺效应与机体的机能状态密切相关。本实验中模型大鼠HPA轴功能异常亢进,经电针治疗可降低抑郁动物血浆CORT、ACTH含量;并可减少下丘脑室旁核AVP阳性神经元数目。说明电针在多个层次对HPA轴功能具有良性、双向调节作用。 笔者认为,本病虽是精神系统疾病,但属中医肝肾阴虚的范畴。实验研究亦表明,肝肾阴虚可导致HPA轴功能亢进,中医滋补肾阴的方剂左归丸能有效调节大鼠亢进的HPA轴状态,降低血中CORT、ACTH及下丘脑CRH水平。治病必求于本,因此取“百会”、“三阴交”穴。“百会”不但位于头部巅顶,“头者神之居”为“精明之府”,具开窍醒神之功。且“百会”为督脉要穴,督脉行于脊里,上行入脑,与肝脉交巅,并从脊里分出,属肾,因此把脑、肾,肝三脏联络起来。“三阴交”为肝脾肾三经交会穴,具滋阴养血、调补肝肾之效。上下二穴相配,整体调节,则有醒脑益阴之功,故取得一定疗效。