运动训练改善心衰大鼠室旁核-氨基丁酸b型受体介导的交感出入口抑制性作用机制.docxVIP

运动训练改善心衰大鼠室旁核-氨基丁酸b型受体介导的交感出入口抑制性作用机制 交感神经系统激活是慢性心力衰竭的重要病理特征，也是导致心力衰竭和心力衰竭患者死亡的重要因素。 有研究报道,规律性的运动训练有益于心衰患者的身体康复,心衰患者经过长期的规律性运动训练,不但可以提高生活质量而且可降低死亡率.在动物实验中发现运动训练可提高心衰动物动脉压力感受性反射的敏感性,进而降低心衰状态下的交感兴奋增强作用.另有研究显示,运动训练可通过增加心衰大鼠下丘脑室旁核一氧化氮合成酶的表达量,进而改善心衰状态下由NO所介导的交感神经抑制性作用而减少心衰状态下交感神经系统的激活作用.进一步的研究还发现室旁核内NO对肾交感神经放电的抑制作用是通过GABA发挥作用的.而在心衰状态下由内源性GABA所介导的对肾交感神经的抑制作用与正常大鼠比也明显减弱,结果提示这一功能性的改变有可能是引起心衰大鼠交感神经系统激动增强的重要机制之一. 纵观以上研究,我们拟使用冠脉结扎法建立心衰大鼠模型,通过对心衰和假手术对照大鼠进行长期游泳训练,观察运动训练改善心衰状态下室旁核内源性GABA所介导的对肾交感神经放电的抑制性作用,并进一步论证运动训练增加心衰大鼠室旁核GABAB受体mRNA表达量可能是其中的重要分子机制. 1 材料和方法 1.1 实验动物及仪器 Wistar 大鼠,雄性,体重180～200 g,由吉林大学实验动物中心提供.肝素钠购于北京鼎国生物技术有限责任公司.α-氯醛糖;CGP35348;滂胺天蓝均购于Sigma-Aldrich公司. 2 实验方法 2.1 假手术组和心力衰竭训练组大鼠游泳训练实验 Wistar大鼠随机分成4组,即假手术安静组(n=8)、假手术训练组(n=6)、心衰安静组(n=8)和心衰训练组(n=8).在乙醚麻醉下将大鼠仰位固定于手术台,自左侧3～4肋间开胸,暴露心脏,于肺动脉圆锥及左心房间找出冠脉左前降支,以0号线立即结扎,将心脏送回胸腔,并挤出胸腔内血液和气体,迅速关闭胸腔,开胸时间不超过30秒.假手术组仅置缝线而不结扎.术后前3天,肌注青霉素,术后第4周对假手术训练组和心衰训练组大鼠行游泳训练实验. 2.2 运动训练 假手术训练组和心衰训练组大鼠被放入一个圆柱状筒(直径120 cm,高80 cm)内进行游泳训练,筒内放一温度计控制水温在30～32 ℃.动物每天上午9:00～10:00被放入筒内,由同一个人监控游泳,每只鼠起初游泳适应性训练15分钟/天,为保证游泳训练的效果,1周后训练时间增至60分钟/天,连续训练4周.每次训练结束后,用电吹风机吹干鼠毛.安静组大鼠除不经受训练外,其他处理与训练组大鼠相同,而游泳训练假手术组和游泳训练心衰组的运动量保持一致.在最后一次运动训练过后,20～24小时内进行大鼠的急性实验部分. 2.3 肾神经传导检测指标 (LVEDP)、左心室最大收缩舒张速率(dP/dt)、肾交感神经传出放电活动(RSNA)、血压(ABP)和心率(HR)的记录 动物腹腔注射乌拉坦(0.75 g/kg)和α-氯醛糖(70 mg/kg)麻醉,如需要可静脉补充α-氯醛糖(0.3 g/kg)麻醉,右颈总动脉插管,通过压力换能器连接到生理记录仪,同步采集LVSP、LVEDP和±dp/dtmax各项指标,记录完左心室舒张末期压后,将聚乙烯导管退出心室,可进一步记录动脉血压,记录大鼠标Ⅱ导联心电图,同步得到心率.然后将大鼠取俯卧位,经腹膜后暴露左肾,在手术显微镜下剥离肾交感神经,结扎远端,将神经中枢端置于双极铂丝电极上,灌入配制好的温热液体石蜡,温度为37 ℃,使神经与记录电极结合处于周围组织绝缘并湿润和保护神经.肾神经传出放电信号经生物电放大器放大后记录到生理记录仪上,同时对肾神经传出放电信号进行积分处理.实验结束时,钳夹神经中枢段,以此时积分值作为RSNA的噪声水平.由多道生理记录仪描记的积分值减去其噪声水平即为RSNA的积分. 2.4 微量注射人工瞳体gm3-4 将动物俯卧位固定于大鼠脑立体定位仪上,参照PaxionsWaston大鼠脑图谱,在室旁核微量注射200 nl相同体积的溶剂(Vehicle)人工脑脊液(pH=7.4),并先后微量注射200 nl CGP35348 (0.5、1、2 nmol),从每次注射完成后开始计时,连续观察RSNA、AP和HR对微量注射药物或人工脑脊液的反应.微注射实验完毕,鉴定注射部位. 2.5 心肌面积测量 上述实验完成后取出心脏,-20 ℃保存.心肌梗死面积测定方法详见文献. 2.6 gabab受体的rt-pcr检测 已有研究报道,室旁核内可表达GABAB受体,而GABAB受体1a亚型是GABAB受体的主导优势亚型,故选择该亚型,通过RT-PCR的方法来检测其与GABAB受体功能的相关性.用于GA