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表达载体;原核表达载体:? 适用于在原核细胞中表达外源基因的载体。
主要元件:强启动子
SD顺序
筛选标志
其它调控基因
;; 一 融合型表达载体;技术关键:克隆基因插入原核序列3’端而维持正确阅读框架。
选择合适酶切位点
加人工合成的DNA接头
构建位相载体;----ATG ---- AAC CTG GAA TTC CTA GGT ---
----TAC -----TTG GAC CTT AAG GAT CCA---
;位相载体----含有3种读码框的系列载体;优点:
表达效率高
产物稳定
易鉴定:融合蛋白分子量大,电泳可鉴定
易纯化:利用融合原核多肽的特性
;Ptac:IPTG诱导
GST融合蛋白—直接纯化
产物切割方便:
pGEX-1?T—凝血酶
pGEX-2T---凝血酶
pGEX-3T---X因子
位相载体; 二 非融合型表达载体 ;主要元件:强启动子
SD:
ATG:第一个密码子
;非融合型表达载体----pPL-Lamda;三 分泌型表达载体:
(一)主要元件:
启动子和SD序列
信号肽序列 :SD下游,编码信号肽,可引导蛋白跨膜
(二) 优点:分泌表达,避免降解。 ;分泌型表达载体----pINIII-ompA1;分泌型融合表达载体----pEZZ18
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