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超微贻贝壳粉对l-乳酸钙大鼠生长的影响 钙是人体骨骼组织的主要组成部分。钙不仅影响儿童的正常发育，而且影响着老年人及骨骼松弛、骨质增生、结肠癌和高血压等疾病。目前,市场上销售的主要以碳酸钙的补充剂为主,且多以畜骨及蛋壳为原料,由于近年陆生动物生长环境的恶化(如疯牛病、禽流感等)以及饲料安全性和残留问题,故人们把选取优质钙源的目光转向了海洋。 贻贝(mussel)又名壳菜,其加工过程中产生的大量贻贝壳,通常被废弃,造成了环境污染和资源浪费。贻贝壳中含有大量的钙质,主要成分为碳酸钙 (占95%以上)。此外,还含有Zn,Mg,P,Si,Fe,K等人体必需的微量元素。本课题组首次对贻贝壳采用气流粉碎工艺,发现经超微粉碎后的贻贝壳粉具有良好的分散性、吸附性、溶解性和化学活性,易被动物吸收和利用,可被开发成为理想的补钙剂。 1 材料和方法 1.1 实验材料 1.1.1 厚壳贻贝产4. 贻贝由浙江省嵊泗贻贝无公害养殖基地提供,由本校生物系赵盛龙教授鉴定为 厚壳贻贝Mytilus coruscusGould。取壳,洗净烘干后进行粗粉碎及细粉碎,然后用气流粉碎机粉碎(其中ф2μm占80%以上),常温下保存备用。 1.1.2 低钙饲料的准备 由玉米32%,小麦30%,豆粕15%,植物蛋白粉20%,盐10%和色拉油20%配制而成。 1.1.3 实验动物 出生21d断乳大鼠,♀♂各半,由浙江省实验动物中心提供,动物生产合格证号:SCXK(浙)2003-0001。 1.1.4 elisa法检测 钙、磷试剂盒由美国Beckmen公司提供;碱性磷酸酶测定(Elisa法)试剂盒购自美国Metra Biosystems Inc.公司;其他试剂均为国产分析纯。 1.1.5 l-16c型、dl-5型速质机 AO型台式微型气流粉碎机;Anke TGL-16C型离心机;DL-5型低速大容量离心机;日立7020型全自动生化分析仪;Spectra AA220系列原子吸收仪。 1.2 实验方法 1.2.1 采用贝壳粉矿矿质分析 参照GB7887-1987原子吸收仪测定。 1.2.2 实验饲料及钙的用量和用量 断乳SD大鼠,50只,体重60g左右,适应性喂养4d,然后喂10d的基础低钙饲料作为空耗期。空耗期后,按体重随机将大鼠分成5组,每组10只,♀♂各半。Ⅰ组(对照组):饲喂基础低钙饲料(含钙量为1.5mg·g-1);Ⅱ组:基础低钙饲料+低剂量市售L-乳酸钙(含钙量11mg·g-1);Ⅲ组:基础低钙饲料+高剂量市售L-乳酸钙(含钙量23.6mg·g-1);Ⅳ组:基础低钙饲料+低剂量贻贝壳粉(含钙量11.1mg·g-1);Ⅴ组:基础低钙饲料+高剂量贻贝壳粉(含钙量23.4mg·g-1)。 大鼠单笼喂养,自由进食和饮用去离子水,实验期4w,于实验最后3d进行代谢实验,测定饲料钙、粪钙,计算钙的吸收率。实验结束处死大鼠,收集血清,测定钙、磷含量,同时快速分离各组织器官,测定其钙含量。 1.3 观察指标和方法 1.3.1 钙的含量分布 体重、身长,粪钙,血清钙、血清磷、碱性磷酸酶活性及红细胞中钙含量,骨骼、骨骼肌、心脏、肾、肝组织中钙含量。 摄入总钙量=总饲料量×饲料含钙量 钙吸收率(%)=(摄入总钙量-粪钙)/摄入总钙量×100 1.3.2 大鼠的终身长度和体重测试 用游标卡尺测大鼠终身长;用动物天平称大鼠终体重。 1.3.3 钙含量测定 用原子吸收法测饲料、大鼠粪钙、血及组织器官中的钙含量。 1.3.4 血清生化指数的检测 按试剂盒说明操作,用全自动生化分析仪分别测定血清钙、磷含量及碱性磷酸酶活性。 1.4 统计处理 结果以均数+标准差(ˉx±s)表示,采用SPSS 10.0国际通用软件包,对检测结果进行t检验。 2 结果 2.1 铁、锌等多矿质元素 从表1可以看出,超微粉碎的贻贝壳粉体中,钙含量约占35.00%,另外还含有丰富的铁、锌等多种矿质元素,多数为生物体生长发育所必需;而砷、汞、铬等有害元素含量远低于国家标准,食用较安全。 2.2 实验中的大鼠生长 表2结果显示,补钙组大鼠的终身长和体重显著高于对照组,超微贻贝壳粉组大鼠生长状况良好,与市售L-乳酸钙组基本相当。 2.3 贝壳粉对大鼠钙吸收的影响 从表3可以看出,补钙组的钙吸收率均极显著高于对照组,超微贻贝壳粉具有良好的钙吸收率,与市售L-乳酸钙相仿。 2.4 对大鼠血清碱性磷酸酶活性的影响 检测结果如表4所示,补钙组大鼠的血清含钙量、含磷量均极显著高于对照组,贻贝壳粉组与L-乳酸钙组比较,差异不明显。通常,血清碱性磷酸酶的活性正常值在100U/L以内,从表4可以看出,补钙组大鼠的碱性磷酸酶活性都维持在正常水平,且极显著低于对照组;而贻贝壳粉组与L-乳酸钙组无显著区别。说明超微贻贝壳粉可以明显、高效地增加血清钙,并能